高血压病人血清中抗AT1受体抗体介导血管平滑肌细胞增殖的信号通路研究

摘要

目的：研究高血压病人血清中抗AT1受体自身抗体（AT1-AA）类似血管紧张素II（AngII）致大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）增殖效应中胞内信号转导通路。
　　 方法：大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞培养及鉴定。同时将收集到的抗AT1受体抗体阳性的高血压病人血清经硫酸铵沉淀粗提、免疫亲和层析法纯化，ELISA法检测其滴度。设立不同的对照组用BrdU试剂盒检测AT1-AA及AngII等致细胞增殖的情况。另外，用AT1-AA刺激后的细胞裂解提取总蛋白，经Western印迹方法分析胞内JAK/STAT及NF-κB信号分子激活及表达状况，用凝胶阻滞实验（EMSA）检测NF-κB的转录活性。
　　 结果：0-24h内AT1-AA所致的血管平滑肌细胞增殖效应类似于AngII，尤其以12h内明显，其在450nm处OD值AT-AA组（0.236±0.0118）较其他处理组高：AG490+AT1-AA组(0.176±0.0088)、PDTC+AT1-AA组（0.172±0.0096）、Losartan+AT1-AA组(0.119±0.0059)及Serum Free组(0.127±0.0064)。Western blotting结果显示：AT1-AA刺激组中NF-κB及磷酸化的JAK2，STAT1和STAT3分子表达水平比对照组升高明显；核蛋白中NF-κB表达在15 min和120 min最高而总蛋白中STAT1及STAT3分别在30 min和15 min处达峰。AT1-AA作用后STAT3的激活比STAT1更稳定且重要，其中峰值处pSTAT1/STAT1和pSTAT3/STAT3的相对灰度比分别是0.387±0.0114和0.734±0.0018。并且AT1-AA介导的上述信号分子表达的增加可以被Lorsatan、AG490、PDTC所抑制。EMSA提示AT1-AA和AngII所致NF-κB的转录活性激活都较空白对照组，Losartan组及PDTC组增加。
　　 结论：研究表明纯化的高血压病人血清中AT1-AA可通过AT1受体介导致大鼠血管平滑肌细胞增殖，且此效应中有NF-κB和JAK-STAT信号分子的激活。同时实验结果还显示JAK-STAT途径中STAT3分子的活化起到主导作用。因此，该实验提示了AT1-AA有类似于AngII的激动样效应但在两者在信号转导途径方面存在一定的差异。