腺病毒载体介导shRNAs抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5基因表达的研究

摘要

目的: 应用腺病毒载体介导特异性短发夹RNA（shRNAs）抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5基因的表达，探讨运用RNA干扰 (RNAi)技术治疗勃起功能障碍 (ED)的可行性。
　　 方法: 构建靶向大鼠PDE5基因2个位点的shRNAs重组腺病毒rAd-rPDE5-shRNA，将其转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞48h后，通过荧光标签进行显微计数确定转染效率，并以RT-PCR及Western blot检测PDE5基因的表达水平。
　　 结果: 经双酶切和PCR鉴定确认rAd-rPDE5-shRNA构建成功，转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞效率达95％以上，并使PDE5基因表达在mRNA水平抑制(80.78±2.30)％，在蛋白水平抑制(67.39±3.33)％。
　　 结论: 以腺病毒为载体可高效介导shRNAs进入大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞并能稳定、有效地干扰大鼠PDE5基因的表达，构建同一载体表达2个siRNAs序列抑制同一靶基因的效率强。该研究为应用RNAi技术进行ED的基因治疗奠定了基础。