鹿藿根提取物的抗生育研究及其化学成分分析

摘要

目的：研究鹿藿根溶剂提取物的抗生育作用并分析化学成分。
　　 方法：
　　 1.浸渍法和超声波提取法联合提取鹿藿根溶剂提取物；用柱层析法分离鹿藿根醋酸乙酯提取物和水提取物；用核磁共振、红外光谱及质谱等鉴定纯品的化学结构。
　　 2.生育研究：
　　 (1 交配试验观察小鼠的生育能力：雄鼠灌胃给药，雄雌合笼1周，分笼后10天处死并解剖雌鼠，了解妊娠情况，计算妊娠率、妊娠抑制率、妊娠抑制纠正率。
　　 (2 附睾精子计数及活动度测定。
　　 (3 形态学检查：双固定法(NBF+Bouin’s)固定睾丸和附睾、HE 染色、光学显微镜观察，了解形态学改变。戊二醛固定、锇酸等染色，电镜观察了解睾丸、附睾超微结构变化情况。荧光免疫组化技术了解岩藻糖苷酶在睾丸、附睾分布情况。
　　 (4小鼠超排卵体外受精实验研究几种纯化合物的抗生育作用。
　　 3.抗菌实验琼脂平皿稀释法测定鹿藿根提取物的最低抑菌浓度(MIC)。
　　 结果：
　　 1.到4种鹿藿根提取物即乙醇提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水提物。4种提取物用浸渍法提取比例分别为7.7[％]、 0.62、0.64和7.03，用浸渍加超声联合提取的方法提取比例分别为17.9、1.70、1.74、16.2。
　　 2.4种提取物用雌雄合笼交配实验法进行了抗生育研究并进行了作用强度比较。实验以雷公藤多苷为阳性对照，用100 mg·kg-1 ·d-1，每天1 次，连续用药11周，结果4种提取物均能降低小鼠妊娠率，乙醇提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提物用药各组的雌性小鼠妊娠率分别为30、20、40 及10，但正丁醇提取物所致小鼠妊娠率与正常对照组间差异无显著性(P>0.05。
　　 3.两种剂量(100 mg·kg-1 ·d-1、400 mg·kg-1 ·d-1)的醋酸乙酯提取物动态观察对小鼠生育能力的影响，结果醋酸乙酯提取物的抗小鼠生育作用呈现量效关系且随着用药时间的延长作用相应增强。同时也发现该提取物的抗生育作用与附睾精子计数结果不完全一致。荧光免疫组化研究发现，醋酸乙酯提取物对附睾管(包括精子和精浆)的岩藻糖苷酶含量有较明显的降低作用。
　　 4.3种(25 mg·kg-1 ·d-1、100 mg·kg-1 ·d-1、400 mg·kg-1 ·d-1)剂量的鹿藿根水提物动态观察对小鼠生育能力的影响，结果3种剂量下各组小鼠在第3周后的妊娠率分别为70、25、20，在第11周后分别为50、10、10，即在100mg·kg-1 ·d-1、400 mg·kg-1 ·d-1 剂量时的抗生育作用明显，而25 mg·kg-1 ·d-1 剂量时没有明显抗生育作用。电镜观察鹿藿根水提物影响睾丸生精细胞的成熟、生精细胞排列出现紊乱，附睾上皮细胞线粒体水肿、表面绒毛严重紊乱，附睾中精子顶体膜不规则隆起、精子尾端内部结构发生改变。
　　 5.对人及小鼠的体外杀精实验结果显示鹿藿根乙醇提取物及水提物的杀精作用稍强而醋酸乙酯提取物及正丁醇提取物的杀精作用稍弱，但各组的杀精作用在体外没有明显差异。
　　 6.鹿藿根4种提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的标准菌及临床分离菌均有抗菌作用。其中乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的标准菌、临床分离菌以及铜绿假单胞菌的临床分离菌作用较强；正丁醇提取物对金黄色葡萄球菌的标准菌、临床分离菌作用较强。除水提取物对临床分离的大肠埃希菌作用较强外，其他提取物对大肠埃希菌的标准菌、临床分离菌作用较弱。
　　 7.从醋酸乙酯提取物中分离出了6种纯化合物，其中5个新化合物，1个己知化合物(3-β-D-葡萄糖山萘酚)。根据其结构分别命名为二氢异黄酮类化合物、3β-.葡萄糖豆甾.[2 4】_烯、3-β-D-葡萄糖山萘酚、7.甲氧基乙基山萘酚、3-β-D-葡萄糖.7.倍半萜烯山萘酚、β-甲基2，4一二甲氧基一L一吡喃岩藻糖苷和鉴定为α,β-D.吡喃葡萄糖和α,β-甲氧基一D.吡喃葡萄糖单糖的混合物。5个新化合物中，1个结构全新(倍半萜烯山萘酚)、4个骨架类同而衍生物未知(二氢异黄酮类化合物、 3β-葡萄糖豆甾.[2 4]-烯、7.甲氧基乙基.山萘酚、β一甲基2，4一二甲氧基-L-吡喃岩藻糖苷)。
　　 鹿藿根水提物用乙醇作为洗脱剂进行柱层析，结果分离出一个纯物质，结构鉴定并命名为5β，1 4.二羟基.3β-强心甾2 0(2 2).烯(新化合物)。
　　 8.5种纯品的体外受精率分别是：二氢异黄酮6 2.2％、葡萄糖山萘酚4 3.0％、二甲氧岩藻糖苷3 8.9％、岩藻糖苷酶抗体39.4％、羟羧强心甾二烯3 4.7％，而空白组为6 3.8％。其中羟羧强心甾二烯作用最强，二甲氧岩藻糖苷和岩藻糖苷酶抗体作用非常接近作用次之，二氢异黄酮在体外不抑制受精率。
　　 9.各组鹿藿根提取物对小鼠血清睾酮没有明显差异，体重的增长量与正常对照组问差异无显著性。
　　 结论：鹿藿根乙醇提取物、鹿藿根醋酸乙酯提取物、鹿藿根水提物有抗雄性小鼠的生育作用，以鹿藿根水提物的作用最强。4种提取物还有抗菌作用。鹿藿根醋酸乙酯提取物有含量较多的二氢异黄酮衍生物、有结构新颖的3-β-D-葡萄糖.7.倍半萜烯山萘酚、还有作用比较特殊的β一甲基2，4一二甲氧基-L-吡喃岩藻糖苷等。鉴于鹿藿根水提物的量及其抗生育作用的强度，有必要对羟羧强心甾二烯的进一步研究与开发。