银杏内酯B诱导胚胎干细胞定向分化为心肌细胞的研究

摘要

目的：研究中药成分银杏内酯B可否在体外诱导胚胎干细胞定向分化为心肌细胞，为临床干细胞移植治疗心肌损伤性疾病提供实验证据，旨在为干细胞生物资源的开发和我国传统中药新作用的开发提供理论依据。 方法：小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs) 体外分化培养时采用经典的悬滴、悬浮和贴壁“三步培养法”。在分化的同时加入不同终浓度的银杏内酯B（10-5mol/L、10-4mol/L、10-3mol/L）诱导分化。倒置显微镜下观察分化细胞的形态特征、观察拟胚体（embryonic bodies，Ebs）的大小变化、观察胚体的跳动频率、记录跳动胚体及总胚体的个数；用免疫细胞化学技术检测心肌特异的α-肌节型肌动蛋白（α-sarcomeric actin）；利用流式细胞仪检测分化心肌细胞的比率。 结果：（1）在倒置显微镜下可观察到分化的心肌样细胞于分化第8天出现自发性节律性收缩，到分化第13-14天自发性节律性收缩拟胚体比率达到高峰，随后自发性节律性收缩拟胚体比率降低。不同浓度组银杏内酯B 诱导胚胎干细胞定向分化的心肌样细胞跳动频率和对照组比较均无显著性差异（p>0.05）。（2）被银杏内酯B 诱导后，大多数的ESCs 能分化为心肌样细胞，这些细胞中的α-肌节型肌动蛋白（α-sarcomeric actin）染色呈阳性。（3）银杏内酯B 诱导胚胎干细胞分化为心肌样细胞的有效浓度是10-4mol/L，和对照组比较有显著性差异（p<0.05）。 结论：（1）银杏内酯B不能改变ESCs分化的心肌样细胞的跳动频率。（2）银杏内酯B有促进胚胎干细胞诱导分化为心肌样细胞的能力。