甲状旁腺相关肽调控骨骺干细胞后的stathmin表达

摘要

目的: 研究甲状旁腺相关肽全长及部分肽段[PTHrp(107-139))]对体外培养的骨骺干细胞的调控作用并检测调控后stathmin的表达。
　　 方法:1.显微镜下选取大鼠La Croix环处的软骨及骨骺干细胞，采用免疫磁珠分选细胞的方法，分离出原代骨骺干细胞。2.转化、提取、鉴定本实验室保存的pTet－on质粒、pTRE2hyg-PTHrP(107-139)和PTHrp全长质粒。3.用脂质体介导法做质粒转染将①pTet－on质粒和pTRE2hyg-PTHrp(107-139)质粒共转染入骨骺干细胞,② PTHrp全长质粒转染入骨骺干细胞，待质粒转染后，通过G418(新霉素)筛选得到抗性克隆并将其分别扩增培养，并加入1.0μg/ml的强力霉素(Doxycycline)进行诱导，并设置空白对照。转染后第4小时以及24、72、96小时对各组细胞用Western-blot检测stathmin的表达水平，并抽提各组细胞的RNA进行逆转录，然后通过RT－PCR的方法检测细胞内stathmin的mRNA表达变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。
　　 结果:1. Tet-on基因表达系统能准确的调控骨骺干细胞中的基因表达2. 质粒转染后骨骺干细胞数量明显增多。3. PTHrp全长及部分肽段质粒转染实验组，其骨骺干细胞中stathmin的蛋白水平和mRNA水平均逐渐增加,且增高程度大致相当,空白对照组无明显变化。
　　 结论: 甲状旁腺相关肽及其肽段[PTHrp(107-139)]均可能有促进骨骺干细胞增殖的作用,stathmin在调控中出现高表达，提示细胞增殖。