放射治疗与恩度不同联合模式对人鼻咽癌细胞体内外生长及放射敏感性影响的实验研究

摘要

本研究包括二部分：
　　 第一部分：放射线与恩度不同联合模式对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞 VEGF表达及放射敏感性的影响
　　 目的:探讨放射线联合恩度(Endostar)的不同模式对人鼻咽癌细胞株CNE-2中VEGF表达及放射敏感性的作用。
　　 方法：1. MTT法检测不同浓度(5-640 μg/ml)Endostar 作用24小时后对人鼻咽癌细胞株CNE-2 生长的影响；2.照射联合Endostar 作用于人鼻咽癌细胞株CNE-2的方案共分为6组：单用Endostar(E组)、单纯照射(R组)、使用Endostar 4小时后照射(E4R组)、使用Endostar 24小时后照射(E24R组)、先照射隔4小时后使用Endostar(R4E)、先照射隔24小时后使用Endostar(R24E)，RT-PCR和Western blot检测各组VEGF的表达；3. 克隆形成试验：不同浓度Endostar(0、25、125μg/ml)作用于人鼻咽癌细胞株CNE-2，各浓度组分别给与不同剂量钴-6o 照射，经多靶单击模型拟合细胞存活曲线，获得不同处理组的放射增敏比。
　　 结果：1. Endostar对CNE-2细胞的IC50为(3.01±0.12)mg/ml；2. 当照射剂量为1-5Gy，单纯照射使CNE-2中VEGF表达水平随放射剂量增高而降低(P<0.05)；当照射剂量为2 Gy时，照射联合恩度的各处理组(E4R、E24R、R4E和R24E组)均较单纯照射组能更大程度的下调VEGF mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)，在Endostar 浓度为80 μg/ml时，E24R组较其余各组能最大程度的抑制VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.05)；E4R、E24R、R4E和R24E组中VEGF表达水平仅在Endostar 为5μg/ml、20 μg/ml和80 μg/ml时随药物浓度增高而降低，在Endostar 浓度为125μg/ml和200 μg/ml时，VEGF表达水平随药物浓度增高而增高；3. Endostar 为25μg/ml和125μg/ml时，放射增敏比分别为1.28和1.43。
　　 结论：放射线联合Endostar 较单纯照射和单纯用药可以更大程度的抑制CNE-2细胞VEGF表达；当Endostar 为80 μg/ml，E24R组较其余各组能最大程度的抑制VEGF表达；Endostar对CNE-2细胞有放射增敏作用。
　　 第二部分：放射治疗与恩度不同联合模式对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长及肿瘤放射敏感性的影响
　　 目的：通过构建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，研究放射治疗联合恩度的不同模式对鼻咽癌移植瘤生长的抑制作用及对肿瘤放射敏感性的影响。
　　 方法：构建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，按随机数字表法将其分为7组，分别给予瘤内注射生理盐水(对照组)、5mg/kg 恩度(E1组)、10mg/kg 恩度(E2组)、50mg/kg 恩度(E3组)、10 Gy 放射线照射(R组)、10 Gy 放射线照射后注射50mg/kg恩度(R+E组)、注射50mg/kg 恩度2 天后予10 Gy 放射线照射(E+R组)，恩度均为连续瘤内注射14 天。分时段测量肿瘤体积，注射后1周处死动物，切除肿瘤，免疫组化检测肿瘤组织微血管密度(MVD)、VEGF和HIF-1a表达，免疫荧光双标检测肿瘤血管内皮细胞凋亡。
　　 结果：成功构建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型。瘤内连续注射恩度对鼻咽癌移植瘤生长有抑制作用，且表现为剂量依赖性，治疗第22 天E3组的肿瘤平均体积(4.11±0.16cm 3)较对照组(7.01±0.32 cm 3)有较大程度抑制(P<0.05)；恩度对鼻咽癌移植瘤有放射增敏作用，E+R组的肿瘤生长延迟时间(10.5±1.0天)明显长于R+E组(6.5±0.8 天)、R组(3.8±0.5天)和E3组(2.5±0.2 天)，P<0.05；单纯瘤内注射恩度能导致肿瘤血管内皮细胞凋亡，且呈剂量依赖性，放射治疗联合恩度能促进各单纯治疗组的致肿瘤血管内皮细胞凋亡作用；E+R组的平均MVD 较对照组平均MVD 下降了87[％]，下降程度明显高于E3组(32[％])和R组(41[％])，P<0.05；免疫组化半定量分析得出，单纯恩度组(E1-E3组)能下调移植瘤组织中VEGF和HIF-1a表达，且呈剂量依赖性，E+R组和R+E组对VEGF和HIF-1a表达的抑制作用均大于对照组、E3组和R组。
　　 结论：瘤内注射恩度能抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长；恩度对鼻咽癌移植瘤有放射增敏作用；恩度可以导致肿瘤血管内皮细胞凋亡，放射治疗联合恩度能促进内皮细胞凋亡、减少肿瘤微血管密度和下调肿瘤组织中VEGF及HIF-1a表达。