哇巴因调节白血病细胞增殖的作用与相关分子机制的研究

摘要

本研究分为三部分：
　　 第一部分：哇巴因对白血病细胞增殖与钠泵α1 亚单位表达的影响
　　 目的：近年来研究表明钠钾ATP酶可通过与强心甾类固醇（CTS）特异性结合，激活细胞内一系列信号级联反应，调节细胞的增殖与凋亡。本研究通过检测不同浓度的哇巴因对多种白血病细胞株增殖的影响，进一步探讨白血病的发病机制。并研究钠钾ATP酶作为信号转导体的功能效应以及其在细胞增殖调控过程中的作用。
　　 方法：采用MTT方法检测不同浓度的哇巴因（1nmol/L、10nmol/L）在不同作用时间（6h、12h、24h）下对多种白血病细胞株增殖的影响，Western-blot检测白血病细胞株钠钾ATP酶α1 亚单位表达水平的变化情况。
　　 结果：MTT结果表明1nmol/L、10nmol/L 哇巴因均可促进急性淋巴细胞白血病细胞株B95与巨核系白血病Meg01细胞株增殖，Western-Blot结果显示1nmol/L、10nmol/L 哇巴因均可使钠钾ATP酶α1 亚单位表达升高。与空白对照组相比，1nmol/L、10nmol/L 哇巴因作用24h时白血病细胞增殖程度与钠钾ATP酶α1 亚单位表达升高程度差异具有显著性（P<0.05）。哇巴因促进白血病细胞增殖作用及钠钾ATP酶α1亚单位表达升高程度与哇巴因浓度以及孵育时间具有量效关系。
　　 结论：1nmol/L与10nmol/L的哇巴因可促进白血病细胞株B95、Meg01增殖，增殖效应与哇巴因浓度与孵育时间具有量效关系。哇巴因促白血病细胞增殖效应可能与钠钾ATP酶α1 亚单位有关，它能通过与哇巴因结合调节多种不同来源白血病细胞株的增殖。
　　 第二部分：哇巴因调节白血病细胞增殖的信号通路研究
　　 目的：强心甾类固醇（CTS）能与钠钾ATP酶特异性结合，激活细胞内一系列信号级联反应，调节细胞的增殖分化与凋亡。本研究以不同来源的白血病细胞株作为研究对象，通过观察不同浓度的哇巴因与特异性信号通路抑制剂对白血病细胞株增殖的影响，进一步探讨白血病的发病机制、钠钾ATP酶的信号传导功能以及相关信号通路在白血病发病中的作用。
　　 方法：采用MTT方法检测不同浓度的哇巴因（1nmol/L、10nmol/L）以及与c-Src激酶抑制剂PP2、MEK 抑制剂PD98059 联用对多种白血病细胞增殖的影响，RT-PCR与Western-blot检测白血病细胞株钠钾ATP酶α1 亚单位表达的变化情况。
　　 结果：1nmol/L、10nmol/L的哇巴因均可促进急性淋巴细胞白血病细胞株Jhhan与巨核系白血病M07e细胞株的增殖，并使白血病细胞的钠钾ATP酶α1 亚单位表达升高。PP2、PD98059可不同程度抑制哇巴因对白血病细胞株的促增殖作用以及降低钠钾ATP酶α1 亚单位的表达。
　　 结论：钠钾ATP酶具有重要的信号传导功能，它能通过特异性结合哇巴因激活多种信号通路调节白血病细胞的增殖。哇巴因促进白血病细胞增殖效应与Src 激酶、MAPK等信号通路活化有关。
　　 第三部分：Bcl-2基因家族参与哇巴因诱导白血病细胞增殖的研究
　　 目的：本研究通过检测哇巴因对白血病细胞株B95、Meg01增殖的调节作用，探讨Bcl-2基因家族在此过程中的作用。
　　 方法：采用MTT法检测不同浓度的哇巴因（1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L）对白血病细胞株B95、Meg01增殖率的影响，RT-PCR与Western-Blot 分别检测白血病细胞中Bcl-2、Bcl-XL、Bax基因的mRNA表达与蛋白表达。
　　 结果：低浓度的哇巴因（1nmol/L、10nmol/L）可促进白血病细胞株B95、Meg01增殖，高浓度的哇巴因（100 nmol/L）可抑制B95、Meg01增殖，在此过程中出现Bcl-XL、Bax基因表达改变，Bcl-2基因表达无改变。
　　 结论：哇巴因可调节白血病细胞株细胞的增殖，其作用与Bcl-2基因家族表达调控有关。