罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响及其作用机制浅析

摘要

目的：观察罗格列酮对体外培养肝星状细胞（HSC）增殖、凋亡、细胞周期及超微结构的影响；观察罗格列酮对普通培养的HSC和经肝癌条件培养基作用后的HSC表达a-SMA、PDGF-B的影响，初步探讨罗格列酮影响HSC生物学特性的作用机制。
　　 方法：⑴MTT检测不同浓度罗格列酮（0、10、12.5、15、17.5、20μmol/L）无血清培养基对HSC增殖的影响。⑵流式细胞仪（FCM）检测不同浓度罗格列酮（0、10、12.5、15、17.5、20μmol/L）无血清培养基对HSC细胞周期和凋亡率的影响。⑶电镜（TEM）观察15μmol/L的罗格列酮无血清培养基对HSC 超微结构的影响。⑷免疫组化（IHC）半定量检测：1）不同浓度罗格列酮（浓度组别与前者相同）无血清培养基对HSC表达a-SMA、PDGF-B的影响；2）HSC 经24h 肝癌细胞（HCC）条件培养基（按1∶1、1∶2的比例稀释）处理，再用15μmol/L 罗格列酮作用于HSC（另设空白对照组、单纯罗格列酮组和单纯24h 肝癌细胞条件培养基组），观察HSC的a-SMA、PDGF-B表达变化。上述免疫组化结果用计算机图像分析技术进行半定量分析。
　　 结果：①MTT结果显示：罗格列酮对HSC的增殖具有抑制作用，抑制率随着罗格列酮浓度的增加而增加，两者呈量效依赖关系。②FCM结果显示：经不同浓度罗格列酮作用后，HSC的凋亡率、G0/G1 期细胞比例均随着浓度的增加而增加，各浓度组凋亡率的增加均具有非常显著意义（P＜0.01），罗格列酮浓度高于15μmol/L时，G0/G1 期细胞比例增加具有显著意义（P＜0.05）。③透射电镜观察，经罗格列酮作用后，HSC的生长状态受到抑制，部分细胞呈现凋亡相关的超微结构改变，如细胞体积变小，表面绒毛结构减少或消失，核染色质凝集并边集，核固缩，并可见凋亡小体。④免疫组化结果显示：罗格列酮作用于HSC后，其a-SMA、PDGF-B的表达水平随罗格列酮浓度的增加而减少，且两者的表达具有紧密相关性（r=0.971）；罗格列酮作用于经肝癌细胞条件培养基处理后的HSC，其a-SMA、PDGF-B的表达与空白对照组和单纯肝癌细胞条件培养基处理组相比，均有显著下降（P＜0.05）。
　　 结论：罗格列酮能抑制HSC的增殖、活化。其作用机制可能与阻滞HSC于G0/G1 期、诱导HSC凋亡及降低HSC的PDGF表达有关。同时罗格列酮也可抑制癌性条件下的HSC活化和PDGF表达。