卵巢癌化疗耐药与纺锤体检测点功能完整性的相关性研究

摘要

第一部分：
　　 研究背景与目的：紫杉醇是一类疗效确切、应用广泛的化疗药,其作用机制有干扰微管动力学，调控细胞凋亡相关因子与通路，免疫调节和抑制血管生成等多个方面。一般认为稳定微管,抑制胞质微管的解聚,使细胞分裂阻滞在G2/ M 期是紫杉醇发挥抗癌效应的主要机制。目前有研究发现低浓度紫杉醇可能是通过G0/ G1期阻滞而非G2/ M 期阻滞诱导细胞凋亡。紫杉醇杀伤癌细胞的效应是否因浓度差异而机制有所不同，目前报道不甚一致。本实验就不同浓度紫杉醇杀伤卵巢癌细胞的内在机制进行了初步探讨，揭示紫杉醇浓度依赖性的抑癌机制，为紫杉醇临床应用过程中剂量的选择提供理论依据。
　　
　　 方法：
　　 为了确定紫杉醇作用的有效浓度就特异的抑癌机制，我们探索性的以0. 1、10、0.01、50μmol/ L紫杉醇作用于人卵巢癌细胞并采用碘化丙啶（PI) 单染法通过流式细胞术检测在这几个不同浓度Taxol作用下细胞周期的不同变化情况。然后通过周期特异性药物对细胞进行同步化处理,采用PI 单染法检测低浓度(0. 01μmol/ L) 紫杉醇对细胞周期的影响;Annexin Ⅴ/ PI 双染法检测高浓度(50μmol/ L)紫杉醇对卵巢癌细胞坏死的影响。
　　
　　 结果：
　　 ① Taxol浓度为0. 1、1、10μmol/ L时,G2/ M 期细胞比例显著的比0. 01μmol/ L组（P＜0. 01)和50μmol/ L组 （P＜0. 01) 高。
　　 ②卵巢癌细胞经药物thymidine同步化处理后在0. 01μmol/ L taxol的作用下,经过一个细胞倍增时间没有出现G0/ G1期阻滞。
　　 ② 0. 01μmol/ L组,1μmol/ L组坏死细胞比例明显低于50μmol/ L组（P＜0.01)。
　　 结论：
　　 在0. 1～10μmol/ L的浓度范围内,紫杉醇可能通过诱导G2/ M 期阻滞使卵巢癌细胞发生凋亡,浓度为0. 01μmol/ L时紫杉醇诱导凋亡与G0/ G1期或G2/ M 期阻滞均无关,浓度为50μmol/ L时紫杉醇可能主要通过诱导细胞坏死发挥抗癌效应。
　　
　　 第二部分：
　　 研究背景与目的：许多肿瘤细胞的形成都与染色体的缺失或增加相关。这种染色体不稳性多是由于控制染色体分离的相关结构受损。微管与着丝粒正确的连接以及姊妹染色单体在有丝分裂后期能够同步分离是染色体分离所必备的两个条件。这两个过程能否准确的完成与生物体内的校正机制和纺锤体检测点的功能密不可分。研究表明，染色体分离失败可能会导致肿瘤的发生。明白这些机制会对新的抗肿瘤的研发以及肿瘤治疗策略提供有效的帮助。
　　 维持生物体遗传特性的基础是细胞分裂时复制的染色体能够均等的分配到两个姊妹染色单体中，而只有每个姊妹染色单体的着丝粒正确的与微管连接才能确保这一过程的完成。由于微管与着丝粒的连接主要是一个反复的释放回缩的过程，所以不正确的连接常有发生。如果在有丝分裂的后期这种不正确的连接依然持续存在，那么染色体将会产生不均等的分离从而导致非整倍体细胞才产生。因此，细胞内至少存在两种机制来防止这种情况的发生，即校正机制和纺锤体检测点机制。在许多肿瘤的进展过程中，都多少会有这些机制功能的缺少或失调，也因此产生了多种化疗药物来靶向相关的功能。对染色体分离机制的了解越深入，对肿瘤治疗的策略也会更加完善。
　　
　　 方法：
　　 一、构建人Mad2的正义表达质粒，随后以G418进行稳定筛选；
　　 二、采用MTT法和FACS检测Taxol作用下细胞所处的周期，细胞的凋亡率以及存活率；
　　
　　 结果：
　　 成功构建纺锤体检查点蛋白Mad2的正义全长质粒，利用Mad2的正义全长质粒和定购合成的Mad2小片段干扰siRNA来上调和下调卵巢癌细胞株A2780和SKOV3中的mad2的表达，上调Mad2的表达可以使得细胞对紫杉醇的敏感性增加，而Mad2的下调则导致耐药结论一定剂量的紫杉醇可使人卵巢癌A2780及SKOV3细胞发生生长受抑、凋亡及G2/M期阻滞。转染Mad2-siRNA可导致卵巢癌细胞A2780紫杉醇敏感性降低及G2/M期细胞逃逸；上调Mad2的水平可增加SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性。

目录

声明

第一部分 Taxol对卵巢癌细胞 A2780细胞作用的浓度依赖性及相关机制探讨

第二部分 纺锤体检测点蛋白Mad2在Taxol诱导的人卵巢癌细胞化疗耐药中的作用

综述 染色体的分离机制与肿瘤的发生

致 谢