TLR4信号途径在川崎病血管损伤发生机制中的作用

摘要

目的：观察川崎病（KD）急性期血清和丙种球蛋白对单核/巨噬细胞TLR4（Toll-like-receptor 4）信号转导途径分子基因表达的影响，以探讨TLR4 信号途径在KD血管损伤过程中的作用及丙种球蛋白治疗KD可能的作用机制。
　　 方法：
　　 1.实验分组：单核/巨噬细胞（THP1）按以下设计分组：⑴正常血清组：RPMI1640培养基+10％健康儿童血清；KD ⑵血清组：KD ①-CAL-血清组：RPMI1640培养基+10％ KD-CAL-急性期血清；KD ②-CAL +血清组：RPMI1640 培养基+10％ KD-CAL+急性期血清；⑶丙种球蛋白组:KD ①-CAL-+丙种球蛋白组：RPMI1640培养基+10％ KD-CAL-急性期血清+丙种球蛋白20mg/ml；KD②-CAL++丙种球蛋白组：RPMI1640培养基+10％ KD-CAL +急性期血清+丙种球蛋白20mg/ml。
　　 2.THP-1 单核源巨噬细胞培养：人单核巨噬细胞系（THP-1）由武汉大学典型物培养中心（CCTCC）提供，在含10％胎牛血清、0.5％二巯基乙醇的RPMI1640 培养液中,37℃、5％CO2条件下静置培养。取对数生长期细胞，调整密度为1×10 9/Ｌ接种于6 孔板，用160nmol/L PMA 孵育THP-1 细胞24小时，可见80％的细胞由悬浮状态变贴壁状态，且细胞形状由圆形变为梭形、椭圆形或不规则形，提示单核细胞已转化为巨噬细胞。按上述分成培养组（每组各6孔），在各组细胞培养板上加入上述各组条件培养基，继续培养24h后，用0.25％胰蛋白酶溶液消化细胞备检。
　　 3.采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法对单核/巨噬细胞TLR4，MyD88，TRAF6，CD14 mRNA进行扩增，产物琼脂糖凝胶中电泳后，用凝胶成像分析系统测定电泳条带密度值，以G3PDH为内参照，计算目的基因mRNA的相对含量，结果以目的基因与G3PDH条带密度的比值表示。
　　 结果：
　　 1.KD 血清组与正常血清组THP-1 细胞TLR4 信号途径分子基因表达的比较：KD血清组THP-1 细胞TLR4，MyD88，TRAF6 mRNA的表达明显高于正常血清组［(1.27+0.17）％vs(0.26+0.11）％，（1.02+0.15）％vs(0.28+0.12）％，（0.98+0.09）％ vs(（0.22+0.10）％（P<0.01）］，CD14 mRNA表达水平与正常血清组差异无统计学意义（P>0.05）。丙种球蛋白组与KD 血清组相比，TLR4，MyD88，TRAF6 mRNA的表达呈不同程度下降。
　　 2.KD-CAL-血清组和KD-CAL +血清组比较，THP-1 细胞TLR4，MyD88，TRAF6，CD14 mRNA的表达量差异无统计学意义（P>0.05）。
　　 结论：TLR4通路在川崎病的血管炎性损伤中发挥着重要作用，丙种球蛋白可能通过阻断TLR4通路而起到治疗川崎病的作用。

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文摘

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材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

附录 附图

综述 川崎病与TLR4-NF-κ B 途径

致 谢