CR16在睾丸组织中的表达及其与无精子症发病相关性的初步探讨

摘要

目的：检测糖皮质激素区域表达基因16 (Corticosteroids and regional expression 16，CR16)在正常SD大鼠睾丸组织中的表达，为后续研究CR16在人类生殖系统的表达提供前期动物实验及方法学准备。
　　 方法：采用免疫组织化学法检测CR16蛋白在5只正常SD大鼠睾丸组织中的表达情况。
　　 结果：CR16蛋白表达于大鼠睾丸生精小管上皮，主要分布在支持细胞、支持细胞与生精细胞连接区(Sertoli cell-spermatid junctions，SspJs)。
　　 结论：CR16在大鼠睾丸组织中定位于支持细胞及SspJs，提示CR16可能参与精子发生过程。
　　 实验二 CR16在无精子症患者及正常男性睾丸组织中的定位及定量表达
　　 目的：研究CR16在非梗阻性无精子症患者、梗阻性无精子症患者及正常男性睾丸组织中的定位及定量表达，探讨CR16与无精子症发病的相关性。
　　 方法：采用免疫组织化学法和逆转录－聚合酶链反应（reverse transcript polymerase chain reaction，RT-PCR）检测CR16蛋白和CR16 mRNA在6例非梗阻性无精子症患者、23例梗阻性无精子症患者和6例正常男性睾丸组织中的表达情况。
　　 结果：CR16蛋白表达于睾丸生精小管上皮，主要分布在支持细胞胞浆、胞膜及SspJs，非梗阻性无精子症患者睾丸组织中CR16蛋白的表达明显弱于梗阻性无精症患者及正常男性。非梗阻性无精子症患者睾丸组织中CR16 mRNA的表达（0.640±0.021）显著弱于正常男性（0.952±0.036）（P<0.01），梗阻性无精子症患者睾丸组织中CR16 mRNA的表达（0.953±0.036）与正常男性睾丸组织中CR16 mRNA的表达差异无统计学意义（P>0.05）。
　　 结论：非梗阻性无精子症患者睾丸组织中CR16表达水平显著降低，提示CR16可能与非梗阻性无精子症的发病有着相关性，可能参与精子发生障碍。
　　 实验三 CR16在无精子症发病机制中的初步探讨
　　 目的：研究神经型威奥综合征蛋白(neural Wiscott-Aldrich syndrome protein，N-WASP）在非梗阻性无精子症患者及正常男性睾丸组织中的定位及定量表达，探讨CR16与N-WASP在人睾丸组织中的相关性及其在精子发生中的作用。
　　 方法：采用免疫组织化学法和RT-PCR法检测N-WASP mRNA在6例非梗阻性无精子症患者和6例正常男性睾丸组织中的定位及定量表达；用免疫荧光双标记法及激光扫描共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscopy，LSCM）观察CR16与N-WASP在非梗阻性无精子症患者和正常男性睾丸组织中的共表达情况。
　　 结果：N-WASP蛋白表达于睾丸生精小管上皮，主要分布在支持细胞胞浆、胞膜及SspJs，非梗阻性无精子症患者睾丸组织中N-WASP蛋白的表达明显弱于正常男性。非梗阻性无精子症患者睾丸组织中N-WASP mRNA的表达（0.645±0.025）显著弱于正常男性（0.960±0.031）（P<0.01）。CR16 mRNA与N-WASP mRNA在非梗阻性无精子症患者睾丸组织中的相对表达量约为1：1，二者在正常男性睾丸组织中的mRNA相对表达量也约为1：1。免疫荧光双标结果显示，CR16与N-WASP在睾丸SspJs处的表达相叠加，说明二者是以复合物的形式存在于人类睾丸组织中。
　　 结论：非梗阻性无精子症患者睾丸组织中CR16与N-WASP表达水平均显著降低，CR16与N-WASP在SspJs处共表达，提示二者可能以N-WASP-CR16复合物的形式发挥协同作用，可能参与非梗阻性无精子症的发病。

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文摘

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引 言

实验一 CR16在正常SD大鼠睾丸组织中的表达

实验二 CR16在无精子症患者及正常男性睾丸组织中的定位及定量表达

实验三 CR16在无精子症发病机制中的初步探讨

实验小结

综 述 CR16的发现及其对雄性生殖功能调节的研究进展

硕士期间发表或待发表的论文

致 谢