雷帕霉素对人晶体上皮细胞凋亡基因表达和细胞周期之影响的实验研究

摘要

【目的】探讨雷帕霉素（rapamycin）对体外培养的人晶体上皮细胞凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达和细胞周期的影响，为临床上防治后发性白内障开发新型抑制药物提供理论依据。
　　 【材料及方法】取二、三代体外培养的HLECs做RAPA药物实验。1．MTT比色测定法：在96孔培养板中将检测组细胞植入，分为六组，每组设有八个复孔。、分别为只含有细胞及培养液的阴性对照组、含有培养液不含细胞及RAPA的空白对照组、加入含不同浓度雷帕霉素的（20，40，60，80ng/mL)的培养液。经药物作用24、48、72h后用MTT酶联免疫检测仪对各孔实验组进行吸光光度值检测。2．流式细胞仪：用药分组同前，每组作用时间相同，为48h。此后用流式细胞检测仪对不同浓度组进行细胞周期检测。3．实时荧光定量PCR：分别设定不含雷帕霉素的对照组以及含不同浓度雷帕霉素 (20，40，60，80ng/mL)的四个实验组。采用SYBR green-Ⅰ染料法检测细胞Bcl-2和Bax mRNA的表达情况。4．Western-Blot：分别设定不含雷帕霉素的对照组以及含不同浓度雷帕霉素 (20，40，60，80ng/mL)的四个实验组。采用SDS-PAGE电泳法检测细胞Bcl-2和Bax 蛋白表达情况。
　　 【结果】1．MTT比色测定：雷帕霉素对人晶体上皮细胞增殖的抑制呈时间、剂量依赖性。2．流式细胞仪检测细胞周期：雷帕霉素可阻滞人晶体上皮细胞由G1期向S期转换，使G1期细胞增多，S期细胞减少。3.实时荧光定量PCR：雷帕霉素抑制Bcl-2mRNA的表达，同时BaxmRNA表达增强，说明其诱导人晶体上皮细胞的凋亡．4．Western-Blot:雷帕霉素抑制Bcl-2蛋白的表达，同时Bax蛋白表达增强，与实时荧光定量所得结果相同。
　　 【结论】雷帕霉素可以抑制人晶状体上皮细胞增殖，其可能机制不仅仅是阻止了细胞周期的进程，更是在诱导其凋亡的过程中起了促进的作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

绪 言

一、实验材料

二、实验装置

三、实验方法

四、实验结果

结论与讨论

参 考 文 献

综 述雷帕霉素在眼科的应用及临床进展

致 谢