固有免疫细胞AIM2炎性体通路在抗HCMV免疫机制中的作用

摘要

目的:
　　 ①证实AIM2是识别HCMV的DNA感受器；
　　 ②明确HCMV 感染THP-1 源性巨噬细胞对AIM2 炎性体通路中各信号分子的影响；
　　 ③证实AIM2 炎性体通路参与抗HCMV 固有免疫促炎细胞因子反应。
　　 方法:
　　 ①建立HCMV感染THP-1源性巨噬细胞模型：HCMV（AD169株）以MOI=1接种至已用PMA刺激分化的THP-1细胞，建立HCMV感染THP-1源性巨噬细胞模型，同时设立模拟感染对照组、LPS+ATP对照组和poly(dA:dT)对照组；
　　 ② Real-time RT-PCR法定量检测HCMV感染组和模拟感染对照组DNA感受器AIM2、polIII、DAI和TLR9基因转录水平；
　　 ③ Real-time RT-PCR法定量检测HCMV感染组和模拟感染对照组IL-1基因转录强度；
　　 ④在HCMV感染后1 h、3 h、6 h、12 h和24 h，用western blot法检测HCMV感染组、模拟感染对照组和LPS+ATP对照组AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1 蛋白表达变化；
　　 并设立转染poly(dA:dT)后24 h的poly(dA:dT)对照组；
　　 ⑤用针对AIM2和ASC的siRNA，分别转染THP-1源性巨噬细胞，转染后24 h再感染HCMV AD169毒株，并设模拟转染对照组。在感染后6 h，用Western blot法检测细胞内AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1 蛋白表达，并与模拟感染对照组比较；
　　 ⑥用特异性Caspase-1抑制剂（Ac-YVAD-CHO）处理THP-1源性巨噬细胞后，再感染HCMV AD169毒株，同时设模拟处理对照组，在感染后6 h，用Western blot检测细胞内AIM2、ASC、Caspase-1、pro-IL-1和IL-1 蛋白表达水平，并与模拟感染对照组计较。
　　 结果:
　　 ① HCMV 感染THP-1 源性巨噬细胞后6 h可引起DNA感受器AIM2、PolⅢ、DAI基因高表达，而TLR9 变化不明显；
　　 ② HCMV 感染THP-1 源性巨噬细胞后6 h 引起促炎细胞因子IL-1基因高表达；
　　 ③ HCMV 感染THP-1 源性巨噬细胞引起AIM2 炎性体相关蛋白AIM2、ASC和Caspase-1 时序性高表达；
　　 ④ HCMV 感染THP-1 源性巨噬细胞诱导促炎细胞因子IL-1 蛋白高表达；
　　 ⑤ AIM2 siRNA可抑制HCMV诱导的AIM2 炎性体相关蛋白AIM2、Caspase-1和IL-1的高表达，但对ASC 蛋白表达无影响；
　　 ⑥ ASC siRNA 可抑制HCMV 引起AIM2 炎性体相关蛋白ASC、Caspase-1和IL-1的高表达，但对AIM2 蛋白表达无影响；
　　 ⑦特异性Caspase-1 抑制剂Ac-YVAD-CHO对HCMV诱导的AIM2炎性体蛋白AIM2、ASC和Caspase-1 及pro-IL-1的表达都无影响，但可抑制HCMV 感染所致的成熟IL-1 蛋白表达升高。
　　 结论:
　　 ① AIM2是胞质内免疫识别HCMV dsDNA的DNA感受器；
　　 ② HCMV 感染可诱导AIM2 炎性体通路AIM2、ASC和Caspase-1 蛋白高表达；
　　 ③ HCMV 感染可引起促炎细胞因子IL-1 蛋白高表达；
　　 ④ AIM2 炎性体通路参与抗HCMV 固有免疫反应中IL-1的成熟和活化。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前 言

第一部分 HCMV 感染对固有免疫细胞DNA 感受器表达的影响

第二部分 HCMV 感染对固有免疫细胞AIM2 炎性体通路的影响

第三部分 特异性阻断AIM2 炎性体通路相关分子对HCMV激活AIM2 炎性体通路的影响

全文小结

综述：DNA 感受器的研究进展

附录：攻读学位期间发表的论文目录

致 谢