Th17细胞亚群在支气管哮喘中的发病机制及TLR2对Th17细胞分化的调控研究

摘要

第一部分 Th17和Tc17细胞亚群及其细胞因子白介素17在哮喘小鼠动物模型中的表达研究
　　 目的:探讨辅助性T细胞17（Th17）和CD8+IL-17+细胞（Tc17）在支气管哮喘小鼠中的比例变化及其意义。
　　 方法:24只BABL/c 小鼠随机分成两组：哮喘组和正常对照组，每组12只，用卵蛋白（OVA）致敏和激发的方法建立小鼠哮喘模型。然后用流式细胞术检测脾脏单个核细胞中Th17细胞和Tc17细胞所占的百分比；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液中细胞因子IL-17的水平；双标免疫荧光检测肺组织中Th17细胞和Tc17细胞的表达。
　　 结果:哮喘组肺组织炎症改变明显；哮喘组脾脏细胞中Th17细胞比例显著高于对照组，Tc17细胞比例也显著高于对照组；哮喘组BALF中IL-17 水平显著高于正常对照组；哮喘组BAL中细胞总数和嗜酸性粒细胞数目明显高于对照组)；肺组织免疫荧光结果示Th17细胞和Tc17细胞在哮喘小鼠的肺部有表达，主要分布在支气管周围和血管周围，并且数量明显高于对照组。
　　 结论:哮喘小鼠的Th17细胞和Tc17细胞数量增多，并且分泌的细胞因子IL-17水平升高，而且哮喘小鼠肺部有较多的Th17细胞和Tc17细胞浸润，提示Th17细胞和Tc17细胞可能参与了哮喘的发病机制。
　　 第二部分 Toll 样受体2 信号对小鼠淋巴瘤EL4细胞系表达白细胞介素（IL）-17 影响的研究
　　 目的:探讨TLR2 信号通路对小鼠淋巴瘤细胞系EL4细胞表达分泌IL-17A的影响。
　　 方法:用ELISA 法检测各组细胞上清液中IL-17A表达水平，实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中RORγt和IL-17A的mRNA的表达水平变化。
　　 结果:TLR2 配体可以显著增加细胞IL-17A和RORγt和IL-17A的mRNA的表达，而TLR2 抗体可以将这种促进作用抵消一部分，TLR2 配体刺激后细胞上清中IL-17A蛋白水平也明显升高。
　　 结论：Toll 样受体2 信号对小鼠淋巴瘤EL4细胞系表达IL-17是起促进作用的，这种作用可能是通过促进转录因子 RORγt的表达来实现的。
　　 第三部分 Toll 样受体2 信号激活对Th17细胞分化和功能的影响研究
　　 目的:探讨Toll 样受体2 信号在调节Th17细胞的分化和功能方面的作用，并且初步探讨参与调控的信号通路机制。
　　 方法:制作小鼠哮喘模型，免疫磁珠分选CD4+T细胞经体外诱导分化成Th17细胞，细胞分为四组：（1）空白对照组，（2）用TLR2的配体（LTA）激活TLR2 信号组，（3）TLR2的抗体阻断TLR2 信号组，（4）RORc基因的干扰慢病毒组。然后MTT 法检测各组的细胞增殖情况，流式细胞仪检测各组胞内因子IL-17A的水平，ELISA 检测各组的细胞上清液中的IL-17A 蛋白水平，Real-time RT-PCR检测各组的Th17 相关细胞因子（IL-17A、IL-17F和IL-22）的mRNA 水平，并检测转录因子RORγt的mRNA水平的变化。
　　 结果:
　　 （1）MTT 检测结果示，LTA、LTA+TLR2 抗体和LTA+慢病毒都能增加Th17细胞的增殖，与空白对照组比较，P 值的大小分别为P＜0.05，P＜0.001和 P＜0.01。
　　 （2）实时荧光定量PCR结果表明慢病毒感染细胞后可使RORc的mRNA 水平下降86％，各组的Th17 相关基因mRNA 水平检测，LTA组引起IL-17A、IL-17F和IL-22的mRNA 水平明显升高，LTA+TLR2 抗体组和LTA+慢病毒组上述升高效应又被逆转。
　　 （3）蛋白水平检测胞内因子染色流式分析LTA 可以明显刺激增加IL-17A+细胞的百分比，IL-17A+CD8-％由11.7％增加到22.5％。ELISA 检测细胞上清中的IL-17A 结果为LTA组引起IL-17A 蛋白水平增高，而LTA+TLR2 抗体组和LTA+慢病毒组蛋白水平又下降。
　　 （4）TLR2 信号对转录因子RORγt mRNA 水平的影响：LTA组的RORγt mRNA 水平明显增高。
　　 结论:TLR2 信号能促进Th17细胞的增殖，能增强Th17细胞的功能，并且是通过增加特异性的转录因子RORγt的表达来实现的。
　　 第四部分支气管哮喘患者的血浆IL-21和总IgE 水平及其相关性研究
　　 目的:探讨白介素-21（IL-21）和总IgE在支气管哮喘发病时的血清水平及其两者相关性。
　　 方法:随机收集哮喘急性发作期患者38例（急性发作组），哮喘缓解期患者23例（缓解组）和健康者19例（对照组）血清，用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测血清IL-21和总IgE 水平。
　　 结果:哮喘急性发作期患者血清IL-21 水平明显高于正常对照组，急性发作期IL-21 明显高于缓解期组，而缓解期和正常对照组差异无统计学意义。血清总IgE 水平哮喘急性发作期和缓解期均明显高于正常对照组。哮喘急性发作期血清IL-21 水平和总IgE 水平有显著负相关。
　　 结论:IL-21 可能通过调节IgE的分泌，在支气管哮喘的发病中发挥重要作用。

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前言

第三部分Toll 样受体2 信号激活对Th17 细胞分化和功能的影响研究

小 结

综述

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