Escitalopram非依赖于五羟色胺重摄取转运体(SERT)的作用

摘要

临床研究认为中枢神经系统五羟色胺（5-HT）递质系统功能异常与抑郁症或焦虑症的发病和治疗密切相关。目前应用最广泛的抗抑郁药选择性五羟色胺重摄取抑制剂（SSRIs），正是通过抑制突触前膜的五羟色胺重摄取转运体而增强五羟色胺递质系统传递功能。但是SSRIs增加细胞外五羟色胺水平的作用非常迅速，而临床上抑郁症病人往往需要服用药物几个星期甚至数月病情才能得到缓解。因此，增加神经递质系统传递功能并不能解释抗抑郁药的临床效应。目前，许多研究表明慢性抗抑郁药处理后在大脑内发生一些缓慢的适应性反应如神经发生、突触重塑等是缓解病情的关键。神经发生、突触重塑与细胞内脑源性神经营养因子（BDNF）BDNF的增加相关联，而BDNF水平的增加则与细胞内cAMP信息传递增强有关。许多体内或体外研究表明：慢性抗抑郁药处理通过增加腺苷酸环化酶活性而增加细胞内cAMP水平，从而启动神经发生过程。此作用与抗抑郁药促进Gαs从脂筏转位至非脂筏部位有关。本实验中我们应用C6神经胶质瘤细胞（C6细胞，缺乏SERT的表达）来检测抗抑郁药Escitalopram（一种SSRIs）是否改变Gαs在脂筏的分布及影响细胞腺苷酸环化酶的活性。R-citalopram并不具有抗抑郁作用，被报道抑制Escitalopram的某些药理作用，本实验通过同时应用Escitalopram和R-citalopram处理细胞以观测R-citalopram是否影响Escitalopram对于Gαs的作用，同时证实Escitalopram对于Gαs的作用是否非依赖于SERT。
　　 本文分析了Escitalopram和R-citalopram对于C6细胞总Gαs含量及脂筏部位Gαs分布的影响。C6细胞被10μM的Escitalopram、R-citalopram或Fluoxetine处理3天后，应用蔗糖梯度离心方法结合Triton X-100分离出细胞膜脂筏部分，通过Western blot检测脂筏部分Gαs含量及全细胞Gαs含量。研究表明：Escitalopram显著降低C6细胞脂筏部位的Gαs含量，与对照组比较，Gαs含量下降至对照组的50.67±5.91％（n=3，p<0.001）。R-citalopram处理组与对照组间则无明显差异，与对照组比较，Gαs含量为对照组的98.82±7.58％（p>0.05）。而且Escitalopram与R-citalopram均不影响全细胞Gαs含量，与对照组相比较，Gαs含量分别为对照组的96.22±2.02％，91.54±4.75％（p>0.05）。
　　 本文研究了Escitalopram引起脂筏Gαs转位的浓度依赖性。C6细胞分别经0.2μM、1μM、5μM和10μM的Escitalopram处理3天，应用Triton X-100蔗糖梯度离心方法提取脂筏，Western blot方法检测不同浓度的Escitalopram对于脂筏部位Gαs含量的影响。研究表明：1μM、5μM和10μM的Escitalopram均明显降低脂筏Gαs含量，与对照组相比，Gαs含量分别为对照组65.50±3.69％、48.70±4.69％、34.68±2.89％（n=4，p<0.01，,或 p<0.001）。0.2μM处理组与对照组间则无明显差异，Gαs含量为对照组的95.21±7.05％（p>0.05）。组间多重比较结果显示1μM组与10μM组间存在显著性差异（p<0.01）。
　　 本文研究了Escitalopram引起脂筏Gαs转位的时间依赖性。C6分别被1μM、2μM或5μM的Escialopram处理1天、3天或5天。用上述方法提取出脂筏，Western blot检测脂筏部位Gαs含量。研究表明：关于不同浓度的Escitalopram分别处理细胞不同天数对于脂筏Gαs含量的影响，除了1μM Escitalopram处理1天组与对照组比较无明显差别外（p>0.05），其余处理组均明显降低脂筏Gαs含量（（1μM和2μM Esc，n=4；5μM Esc，n=3，p<0.05或p<0.01或p<0.001）。R-citalopram对于Escitalopram降低脂筏Gαs含量的影响 方法：C6细胞分别被1μM Escitalopram组、1μM Escitalopram+1μM R-citalopram组、1μM Escitalopram+5μM R-citalopram组、1μM R-citalopram组及5μM R-citalopram组处理3天，通过上述方法提取脂筏，而后应用Western blot分析脂筏Gαs含量的变化。1μM R-citalopram组及5μM R-citalopram组均不明显改变脂筏Gαs含量（p>0.05）。1μM Escitalopram组、1μM Escitalopram+1μM R-citalopram组、1μM Escitalopram+5μM R-citalopram组则显著降低C6细胞脂筏Gαs含量，脂筏Gαs含量分别是对照组的66.53±3.39％、66.38±6.39％、64.55±10.69％（n=5，p<0.05）。而比较三组之间脂筏Gαs含量则发现无明显差异（p>0.05）。Escitalopram与R-citalopram对于异丙肾上腺素或Forskolin诱发C6细胞cAMP聚集的影响 方法：培养C6细胞于12孔板，分别应用10μM Escitalopram和R-citalopram处理细胞3天，应用4μCi/ml的[3H]腺嘌呤孵育细胞24h标记细胞总ATP含量，通过Dowex和Alumina离子交换柱分离[3H]ATP和[3H]cAMP。结果：Escitalopram显著增加10μM异丙肾上腺素诱发的细胞cAMP的聚集（n=3，p=0.001），R-citalopram则不影响异丙肾上腺素诱发的cAMP的聚集（p>0.05）。Escitalopram和R-citalopram均不改变基础水平细胞cAMP的聚集及Forskolin刺激的细胞cAMP的聚集（p>0.05）。
　　 本文分析了Escitalopram对于Gαs或异丙肾上腺素刺激的C6细胞膜腺苷酸环化酶活性的影响。研究表明：10μM Escitalopram 处理C6细胞三天后，分离出细胞膜，应用[α32P]ATP进行腺苷酸环化酶活性测试实验。Escitalopram显著增强10μMGTPγS或10mMNaF（+20μMAlCl3）或10μM异丙肾上腺素诱发的腺苷酸环化酶活性（n=4，p<0.01或p<0.001）。但是Escitalopram并不改变C6细胞膜基础水平腺苷酸环化酶的活性(p>0.05)。
　　 本研究分析了Escitalopram对于C6细胞腺苷酸环化酶表达的影响。C6细胞被10μM的Escitalopram、R-citalopram或Fluoxetine处理3天后，分离出细胞膜，应用Western blot检测腺苷酸环化酶的含量。结果：与对照组相比较，Escitalopram不影响C6细胞膜VI型腺苷酸环化酶（ACVI，C6细胞腺苷酸环化酶主要表达亚型）的表达，细胞膜ACVI的含量是对照组的97.16±4.50％（p>0.05）。研究表明：Escitalopram显著降低C6细胞脂筏部位Gαs含量并增强腺苷酸环化酶活性，R-citalopram则不显示这些作用，而且R-citalopram并不抑制Escitalopram的这些作用。根据这些结果揭示：Escitalopram通过转移脂筏部位Gαs至非脂筏部位，促进Gαs与非脂筏部位腺苷酸环化酶的耦联而增强cAMP信号传递；而且Escitalopram促使脂筏Gαs转位及增强腺苷酸环化酶的作用并非依赖于SERT。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

参考文献

综 述:抗抑郁药的作用机制与G蛋白信号途径的关系

附录：攻读学位期间发表论文

致谢