牛磺酸对大鼠急性高眼压视网膜神经节细胞的保护作用及其对RhoA/ROCK-2信号传导通路的影响

摘要

第一部分：
　　 目的：观察急性高眼压损伤后RhoA、Rho 相关卷曲螺旋形成蛋白激酶-2（ROCK-2）和内皮素（ET-1）在大鼠视网膜中的分布、表达及其相关性。
　　 方法：30只SD 大鼠随机分为正常组（N组）、急性高眼压后1d组（H1组）、3d组（H3组）、5d组（H5组）和7d组（H7组），制作急性高眼压模型后，用免疫组织化学法观察各组RhoA、ROCK-2和ET-1在视网膜中的分布、平均吸光度（OD）及其相关性，Western blotting 法观察各组RhoA和ROCK-2在视网膜中的蛋白表达量。
　　 结果：N组神经节细胞层（GCL）中仅见散在几个RGCs中表达RhoA、ROCK-2或ET-1，其余各层均未见相应的阳性染色；损伤组视网膜中RhoA、ROCK-2或ET-1的分布范围随损伤时间的延长而扩大，其OD 值均高于相应N组，其中ET-1表达量分别与RhoA或ROCK-2表达量呈显著正相关；H1、H3、H5、H7组视网膜中RhoA或ROCK-2 蛋白表达均高于N组，并随时间的延长显著增加，两两之间比较均有显著性差异。
　　 结论：急性高眼压损伤可以激活视网膜中RhoA/ROCK-2 通路，使RhoA或ROCK-2分布范围变广、表达增加，7天时最显著；也可以使ET-1表达增加；ET-1与RhoA或ROCK-2 之间有显著正相关。RhoA/ROCK-2 通路的激活在大鼠急性高眼压后视网膜损伤中起着重要作用。
　　 第二部分：
　　 目的：观察不同剂量牛磺酸对大鼠急性高眼压模型视网膜神经节细胞的保护作用，并探求最佳用药剂量。
　　 方法：将30只成年雌性SD 大鼠随机分成5组：正常组（N组）、模型组（M组）、模型＋牛磺酸低剂量组（TL组）、模型＋牛磺酸中剂量组（TM组）、模型＋牛磺酸高剂量组（TH组），正常组不做任何处理，后四组制作急性高眼压模型：双眼前房灌注生理盐水，并将盐水瓶升至150cm 高度产生110mmHg的眼内压力，持续60min,其中后三组于造模前一周、当天及其后每天分别腹腔注射牛磺酸5，15，25mg/kg q.d，各组于造模后7天进行双眼图形视觉诱发电位检查评价视功能，之后立即取双眼眼球，HE 染色法定量观察视网膜内层厚度反映视网膜损害情况，TUNEL 法测定RGCs 凋亡指数（AI）反映RGCs 凋亡情况。采用SPSS13.0 统计软件，各指标组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用成组资料t 检验进行分析。
　　 结果：急性高眼压后M组和TL组较之N组视网膜内层厚度显著变薄、PVEP的潜伏期显著延迟、振幅显著降低，TM组和TH组较之N组视网膜内层厚度亦显著变薄、PVEP的潜伏期显著延迟、振幅显著降低，TL、TM 及TH组与M组比较视网膜内层厚度显著增厚、RGCs AI 显著降低、PVEP的潜伏期显著缩短、振幅显著升高，而TH 各指标显著优于TM组和TL组。
　　 结论：急性高眼压损伤后可以引起视网膜内层厚度变薄、RGCs 凋亡和PVEP 潜伏期延迟、振幅降低，牛磺酸可以减轻上述变化，且呈剂量依赖性。牛磺酸最佳治疗剂量是腹腔注射25mg/kg q.d。
　　 第三部分：
　　 目的：研究牛磺酸对大鼠急性高眼压模型中视网膜神经节细胞保护作用及其对RhoA、Rho 激酶2（ROCK-2）及内皮素-1(ET-1)表达的影响。
　　 方法：24只SD 大鼠被随机分为正常组（N组）、模型组（M组）、模型＋磷酸缓冲液组（MP组）、模型＋牛磺酸组（T组），N组不做任何处理，后三组制作急性高眼压模型：双眼前房灌注生理盐水，并将盐水瓶升至150cm 高度产生110mmHg的眼内压，持续60min，其中MP和T组于造模前一周、当天及其后每天分别给予腹腔注射无菌磷酸缓冲液（PBS）25mg/kg q.d和牛磺酸25mg/kg q.d，各组于造模后7天取双眼眼球及心脏血，TUNEL 法观察RGCs 凋亡指数（AI），免疫组织化学法观察各组视网膜中RhoA、ROCK-2 及ET-1的分布、并用平均吸光度值（OD）反映各自表达量，Western blotting 法测定各组视网膜中RhoA、ROCK-2的蛋白表达，放射免疫法测定血浆中ET-1 含量，血液流变仪测量不同剪变率下的全血黏度、红细胞聚集指数（BCAI）和红细胞压积（HCT）。采用SPSS13.0 统计软件，各指标组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用成组资料t 检验进行分析。
　　 结果：M组和MP组视网膜中RhoA（P<0.01）、ROCK-2（P<0.01）、ET-1（P<0.01）的OD 值、视网膜RhoA（P<0.01）、ROCK-2（P<0.01）蛋白表达量、血浆ET-1 含量(P<0.05)、低、中、高切全血黏度、红细胞聚集指数（BCAI）(P<0.05)和红细胞压积(P<0.05)均显著高于N组，而M组与MP组之间差异无统计学意义，T组中视网膜RhoA、ROCK-2、ET-1的OD 值、视网膜RhoA、ROCK-2蛋白表达量、血浆ET-1 含量及血黏度各指标均显著低于M或MP组，并且T组RGCs AI 明显低于M或MP组。
　　 结论：牛磺酸可以抑制大鼠急性高眼压模型中RGCs的凋亡，对RGCs 有保护作用，推测其机制可能与抑制RhoA/ROCK-2 信号传导通路、减少肌动-肌球蛋白交联、抑制平滑肌收缩，减少缩血管因子ET-1表达、降低血黏度有关。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分 大鼠急性高眼压后视网膜RhoA 、ROCK-2和ET-1的表达及其相关性研究

第二部分 不同剂量牛磺酸对大鼠急性高眼压模型视网膜神经节细胞的保护作用

第三部分 牛磺酸对急性高眼压大鼠模型视网膜神经节细胞保护及其对RhoA 、ROCK-2和ET-1表达的影响

文献综述

附录

致谢