MiRNA-148a→DNA甲基转移酶1→MiRNA-148a启动子甲基化在肝细胞癌发生中的意义

摘要

目的：探讨microRNA-148a(miRNA-148a）通过作用于DNA甲基转移酶1（DNMT1）、启动子CpG 岛甲基化维持其自身在肝细胞癌中的异常表达水平并参与肝癌发生的调控。
　　 方法：（1）利用实时定量PCR分别检测正常肝组织，肝癌旁组织和肝癌组织中miRNA-148a,DNMT1 mRNA和RASSF1A mRNA的表达差异；（2）应用Westernblot分别检测不同肝组织中DNMT1和RASSF1A 蛋白质水平的表达变化；（3）转染DNMT1 siRNA 降低其在肝癌细胞株HepG2中表达后，应用实时定量PCR和Western blot分别检测转染前后HepG2中DNMT1和RASSF1A mRNA和蛋白质表达的变化；（4）转染miRNA-148a模拟物上调其在肝癌细胞株HepG2中表达后，应用实时定量PCR和Western blot分别检测转染前后HepG2中miRNA-148a，DNMT1和RASSF1A mRNA和蛋白质表达变化；（5）应用Transwell和CCK-8分别检测转染前后HepG2 侵袭和增殖能力的变化。
　　 结果：（1）MiRNA-148a mRNA在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显降低，且体积大，发生转移的肝癌miRNA-148a表达下降的程度相对较大。（2）DNMT1 mRNA和蛋白质在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显升高而RASSF1A mRNA和蛋白质在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显降低；（3）转染DNMT1 siRNA下调HepG2中DNMT1表达后转染组DNMT1 mRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显下降而转染组RASSF1AmRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显升高；（4）转染miRNA-148a mimics上调HepG2中miRNA-148a表达后转染组DNMT1 mRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显下降而转染组miRNA-148a，RASSF1A mRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显升高；（5）在HepG2中转染miRNA-148a mimics后实验组细胞的侵袭性和增殖能力均明显降低。
　　 结论：MicroRNA-148a在肝细胞癌中表达下调，丧失对其靶基因DNMT1的抑制作用，使miRNA-148a 自身及DNMT1下游的抑癌基因RASSF1A表达抑制可能是肝癌发生的重要机制。

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综述 DNA 甲基化异常与肝细胞癌的关系

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