穿心莲内酯(AP)对内皮细胞表达趋化因子及CD40/CD40L的影响

摘要

目的:观察浓度不同的穿心莲内酯(andrographolide)对被氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)干预的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达趋化因子MCP-1、MIP-1α及表面抗原CD40-CD40L的影响,探讨穿心莲内酯是否具有抗动脉粥样硬化炎性反应的作用及其可能的作用机制。
　　方法:在无菌条件下于同济医院产科手术室取健康新生儿脐带,采用胰蛋白酶消化法原代分离并培养人脐静脉内皮细胞。采用倒置显微镜下形态学观察及间接免疫荧光Ⅷ因子相关抗原鉴定内皮细胞。将培养好的第3代细胞以浓度为1×106/ml接入6孔培养板中并置于5％CO2、37℃培养箱中培养,待细胞近长满培养板底部后行无血清同步培养24小时,继而将细胞分成以下6组:
　　1、空白对照组:加入2mlM199培养24小时;
　　2、ox-LDL组:M199+0.2mg ox-LDL培养24小时;
　　3、ox-LDL+AP(25mg/L)组;
　　4、ox-LDL+AP(50mg/L)组;
　　5、ox-LDL+AP(100mg/L)组;
　　6、ox-LDL+AP(200mg/L)组;ox-LDL终浓度为0.1mg/ml。
　　先将3-6组的细胞与喜炎平注射液中培养2小时,然后再加入ox-LDL共同培养至24小时。用间接酶联免疫实验(ELISA)检测细胞上清液中MCP-1、MIP-1α蛋白的表达;干预好的细胞用于提取总的RNA及流式细胞术实验;应用定量RT-PCR检测MCP-1、MIP-1α mRNA的表达;各组细胞表面CD40/CD40L的表达采用间接免疫荧光得以检测。
　　结果:与对照组相比,ox-LDL组MCP-1、MIP-1α蛋白、mRNA表达明显升高(P<0.01),内皮细胞表面CD40及CD40L荧光强度明显增强;与ox-LDL组相比,低剂量穿心莲内酯组(25mg/L、50mg/L组)MCP-1、MIP-1α蛋白、mRNA表达无明显变化(P>0.05),细胞表面CD40及CD40L荧光强度无明显增减;而中高剂量穿心莲内酯组(100mg/L、200mg/L组)MCP-1、MIP-1α蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.01)、CD40与CD40L荧光强度明显降低,且200mg/L组趋化因子的表达及CD40与CD40L荧光强度低于100mg/L组(P<0.01)。
　　结论:中高浓度的穿心莲内酯具有抑制内皮细胞MCP-1、MIP-1α转录及翻译的作用,其以上作用可能是通过抑制内皮细胞CD40/CD40L信号途径的传递完成的。

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主要英文缩略语索引

1、引言

2、实验部分

3.实验结果

4、讨论

5、结论：

参考文献

趋化因子及其受体在急性冠脉综合征中的作用的研究进展

参考文献

致谢