激活素A对LX-2细胞增殖、分泌及激活素受体相互作用蛋白2表达的影响

摘要

目的:通过观察激活素A(activin A,ACTA)对人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系LX-2细胞增殖、分泌细胞外基质(extracetular matrix,ECM)的影响及激活素受体相互作用蛋白2(activin receptor-interacting protein 2,ARIP2)在LX-2中的表达情况,探讨治疗激活素诱导的肝纤维化的基因靶点。
　　方法:用CCK-8法检测ACTA对LX-2细胞增殖的影响,确定ACTA作用浓度;设置空白对照组与ACTA作用组,取培养上清,用化学免疫发光法检测Ⅲ型前胶原N端肽(amino-terminal peptide of type Ⅲ procollagen,PNP)Ⅲ、Ⅳ型胶原(type Ⅳ collagen,Ⅳ-COL)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)及层粘连蛋白(laminin,LH)的含量;收集细胞,实时荧光定量PCR检测LX-2细胞激活素ⅡA型受体(activin receptor ⅡA,ActRAⅡ)、激活素ⅡB型受体(activin receptor ⅡB,ActRB)Ⅱ和ARIP2mRNA的表达;western blot进一步观察ActRAⅡ、ActRBⅡ、ARIP2蛋白的表达。
　　结果:1、ACTA可刺激LX-2增殖,1-20μg/L浓度范围内作用轻微(P>0.05),而80-320μg/L的ACTA作用明显增强(P<0.01),且在细胞指数生长期对刺激LX-2增殖呈时间浓度依赖性。2、ACTA刺激后的PNPⅢ、Ⅳ-COL和HA表达水平均呈上升趋势,表现出与时间和剂量较强的依赖关系(成正比);而LH仅在后期(72h)将ACTA上调到200μg/L时,与正常对照组比才出现统计性差异。3、LX-2能够表达特异性ARIP2mRNA和ActRAmRNAⅡ;ACTA刺激LX-2ActRAⅡ、ARIP2mRNA表达呈剂量依赖性升高,进一步检测表明经ACTA作用ActRAⅡ、ARIP2蛋白表达亦呈剂量依赖性增加,但ACTA对ActRBmRNAⅡ和蛋白表达作用并不明显。
　　结论:ACTA可通过刺激HSC增殖和分泌胶原参与肝纤维化的形成;ARIP2作为激活素信号传导抑制蛋白,在LX-2中的表达受ACTA影响,并可能与ActRAⅡ有关;ActRAⅡ-ARIP2受体信号传导途径有可能成为治疗激活素诱导的肝纤维化的基因靶点。

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前 言

第一部分 激活素A对LX-2细胞增殖的影响

实验材料与方法

结 果

讨 论

第二部分 激活素A对LX-2细胞分泌细胞外基质及激活素受体相互作用蛋白2表达的影响

实验材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

综 述

参考文献

附 录

致谢