靶向沉默RNF8增加肺腺癌A549细胞放射敏感性

摘要

【目的】观察抑制RNF8表达对肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响,并探讨RNF8放射增敏的潜在机制。
　　【方法】选取人肺腺癌A549细胞为实验对象,用RNA干扰技术沉默RNF8表达,采用实时PCR及Westernblot验证干扰效果,并通过克隆形成实验分析抑制RNF8表达对A549细胞有无放射增敏作用。通过免疫荧光检测γ-H2AX焦点动态变化,进一步运用免疫荧光及Westernblot分析Ku70、Rad51的表达情况,流式细胞技术检测细胞周期分布和凋亡情况以探讨放射增敏的可能机制。
　　【结果】RNF8siRNA转染组RNF8mRNA拷贝数明显减少,蛋白表达水平降低,细胞存活分数、D0、Dq值均较对照组减少,放射增敏比为1.54。转染RNF8siRNA后,细胞内γ-H2AX焦点数目在放射后0.5、2、6及24hr均显著高于对照组,γ-H2AX焦点表达时间延长;DSB修复相关蛋白Rad51核内焦点消失且蛋白表达水平低下,而Ku70焦点数目及蛋白表达水平与对照组相比无差别;G2/M期阻滞时间延长,凋亡百分比与对照组相比无差别。
　　【结论】1)抑制RNF8表达增加肺腺癌A549细胞放射敏感性,RNF8可以作为肺腺癌增敏治疗的一个有效靶点。2)下调RNF8表达水平,抑制了DNA损伤反应中Rad51募集和蛋白表达水平,导致同源重组修复途径受阻,DSB不能被有效修复,同时延长G2/M期阻滞时间,从而增加A549细胞放射敏感性。

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