11天胎龄(E11)大鼠胚胎中脑前体细胞体外培养特性研究

摘要

目的:体外培养11天胚龄鼠(E11)的中脑前体细胞(ventralmeseneephalieprecursor,VMP),对其在自我更新、增殖分化等特点进行研究。方法:取受孕11天近交系大鼠胚胎的腹侧中脑细胞,第一天在维持培养液(P1液)中培养,第2-7天在增殖培养液(P2液)中培养,第8-14天在分化培养液(D液)中培养,每天对细胞进行观察并计数,使用免疫荧光细胞染色法分析前体细胞分化情况,并对不同胎龄鼠胚来源中脑前体细胞的细胞特性进行比较。结果:E11神经干细胞可在体外大量培养,第1-5天细胞生长较慢,5天以后细胞呈几何倍增,其在特定细胞因子的作用下可分裂、复制及增殖分化,同时表达新生细胞特异性抗原nestin等,细胞群体使用免疫荧光染色显示除可见VMP外,还可见大量的神经元(包括多巴胺能神经元)和星形胶质细胞等。与其他胎龄的胚胎来源细胞相比胚龄11天的最好。结论:近交系SD大鼠中脑前体细胞能够在体外扩增并分化,并以胚龄11天的腹侧中脑前体细胞的增殖分化能力最强,可用其得到较多的多巴胺能神经元用于神经变性疾病的细胞移植治疗,并为将来的在体研究和临床应用提供细胞层面的理论依据和实验数据。

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