高迁移率族蛋白1(HMGB1)在肝细胞癌组织中的表达、亚细胞定位及与预后相关性研究

摘要

第一部分 高迁移率族蛋白1(HMGB1)在肝细胞癌组织中的表达、定位及与预后相关性研究
　　目的：高迁移率族蛋白1(highmobilitygroupbox1,HMGB1)作为核蛋白和细胞因子发挥着双重作用。HMGB1在肝细胞癌中所起的作用尚不清楚,因此,我们分析了HMGB1在肝细胞癌组织、癌旁组织中的表达、亚细胞定位及与预后相关性,进一步了解肝细胞癌的分子病理学机制。
　　方法：本研究运用免疫组织化学方法分析155例肝细胞癌病例的癌组织、癌旁组织中HMGB1的表达及亚细胞位情况。酶联免疫吸附方法(ELISA)检测肝细胞癌病人血清HMGB1水平。同时,分析HMGB1表达水平与临床病理特征及预后的相关性。
　　结果：免疫组织化学显示所有正常肝组织中(18例)均存在HMGB1表达,HMGB1蛋白主要定位于细胞核内,细胞质中几乎没有。和正常肝组织的肝细胞HMGB1分布情况相比,76.6％(119/155)的癌旁组织中的肝细胞存在不同程度的HMGB1从细胞核到细胞质的转位。所有的肿瘤组织均存在HMGB1蛋白表达,HMGB1蛋白主要定位于细胞核内,肿瘤组织中核HMGB1蛋白水平明显高于癌旁组织(p<0.001)。27.1%肿瘤组织中存在细胞质HMGB1表达。同时,ELISA检测到肝细胞癌病人组血清中HMGB1水平明显高于健康对照组(p<0.01)。相关性分析显示肿瘤组织中细胞核HMGB1表达水平与Edmondson-Steiner等级(p<0.001)、TNM分期(p<0.001)、HBV-DNA载量(p=0.033)、肝纤维化程度(p=0.002)及脉管侵犯(p=0.027)有明显正相关性;癌旁组织肝细胞内上调的细胞质HMGB1蛋白水平与高HBV-DNA载量(p<0.001)及严重肝纤维化(p<0.01)明显正相关。多因素分析结果显示癌旁组织肝细胞细胞质HMGB1蛋白水平是影响无瘤生存率(p=0.006,HR=2.022,95%CI:1.222–3.343)和总体生存率(p=0.014,HR=2.102,95%CI:1.162–3.806)的一个独立预后因素。
　　结论：肝细胞癌组织中细胞核HMGB1蛋白表达上调和预后有明显相关,但不是独立的预后因素;癌旁组织中肝细胞内HMGB1的胞浆转位是无瘤生存率和总体生存率的独立预后因素。在行根治性肝切除后,进一步治疗策略可能从HMGB1在癌旁组织的表达、亚细胞分布特征中获益。
　　第二部分 外源性的高迁移率族蛋白1(HMGB1)促进肝癌细胞的迁移、侵袭
　　目的：体外研究外源性的HMGB1对肝癌细胞恶性行为的作用并探讨可能的机制。
　　方法：采用CCK-8方法检测外源性的HMGB1对肝癌细胞增殖的影响;运用细胞迁移和侵袭试验评估外源性的HMGB1对肝癌细胞恶性行为的作用;同时使用细胞外HMGB1功能抑制剂甘草酸处理肝癌细胞进一步确定HMGB1作用;运用Western-blot方法检测不用浓度HMGB1处理后肝癌细胞中ERK蛋白激活情况。
　　结果：CCK-8结果显示外源性的HMGB1可以促进肝癌细胞的增殖,但并非剂量依赖性;细胞迁移试验结果显示HMGB1处理后的Hep3B细胞迁移数增加到2.01倍(±0.24)(p<0.01),处理后的Huh7细胞迁移数增加到1.62倍(±0.08)(p<0.01)。同样地,细胞侵袭试验显示外源性HMGB1处理后的Huh7细胞穿过基质胶的数量增加到2.06倍(±0.18)(p<0.01)。同时,甘草酸可以通过抑制外源性HMGB1减弱HMGB1引起的肝癌细胞迁移、侵袭能力增加。Westen-blot检测结果证实HMGB1可以促使Hep3B和Huh7细胞中ERK1/2快速磷酸化,但并非浓度依赖或时间依赖性;合用甘草酸处理后可以减弱HMGB1引起的ERK1/2的激活。
　　结论：外源性的HMGB1可以促进肝癌细胞的迁移、侵袭,可能涉及到ERK信号通路的激活。

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前言

参考文献

中文摘要

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第一部分 高迁移率族蛋白1（HMGB1）在肝细胞癌组织中的表达、定位及与预后相关性研究

1.1材料与方法

1.1.1材料

1.1.2实验方法

1.2结果

1.2.1高迁移率族蛋白1（HMGB1）在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁组织肝细胞中的表达、亚细胞定位情况

1.2.2肝细胞癌组织中核HMGB1表达水平与临床病理特征关系

1.2.3癌旁组织肝细胞中胞浆HMGB1表达水平与临床病理特征关系

1.2.4肝癌组织核HMGB1水平与生存预后关系

1.2.5癌旁组织肝细胞胞浆HMGB1水平与生存预后关系

1.3讨论

参考文献

第二部分 外源性的高迁移率族蛋白 1（HMGB1）促进肝癌细胞的迁移、侵袭

2.1 材料方法

2.1.1材料

2.1.2实验方法

2.2结果

2.2.1细胞外HMGB1促进肝癌细胞的增殖

2.2.2外源性的HMGB1促进肝癌细胞的迁移和侵袭

2.2.3外源性的HMGB1促进肝癌细胞的迁移、侵袭，可能涉及到ERK信号通路的激活

2.3讨论

参考文献

综述

附录

致谢