TFH细胞及其相关细胞因子在变应性鼻炎小鼠模型中的表达和意义

摘要

第一部分变应性鼻炎小鼠动物模型的建立
　　目的:建立变应性鼻炎小鼠动物模型,探讨变应性鼻炎鼻腔粘膜随鼻内激发时间不同的组织学变化。
　　方法:4~6周龄BALB/c小鼠,用卵清蛋白50μg、氢氧化铝凝胶5mg加生理盐水1ml配成混悬液进行腹腔注射基础致敏共7次;5％卵清蛋白生理盐水滴鼻进行鼻腔激发,按组分别连续激发10天,20天,30天。对照组用生理盐水腹腔注射和滴鼻。观察小鼠行为学变化,酶联免疫吸附法测试外周血OVA-sIgE的水平,HE染色观察鼻粘膜嗜酸性粒细胞浸润情况,检测结果采用SPSS16.0统计软件进行数据处理,组间比较用T检验。
　　结果:造模结束后小鼠行为学评分分别为5.01±1.01、6.43±1.12、8.56±1.64,对照组0.85±0.23;鼻黏膜内EOS计数分别为45.91(45.91±5.80)pg/ml、48.81(48.81±3.49)pg/ml、51.38(51.38±3.19)pg/ml,对照组0.69±0.12;血清OVA-sIgE浓度分别45.91(45.91±5.80)pg/ml、48.81(48.81±3.49)pg/ml、51.38(51.38±3.19)pg/ml,对照组为41.71(41.71±2.58)pg/ml。T检验显示,实验组和对照组之间均存在显著性差异(P﹤0.05),AR模型组之间差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论:变应性鼻炎小鼠动物模型造模成功,随着鼻内激发时间的延长,OVA-sIgE浓度和症状有升高趋势。
　　第二部分TFH细胞在变应性鼻炎小鼠模型外周血中的流式细胞分析
　　目的:流式细胞术分析TFH细胞在变应性鼻炎小鼠模型外周血的变化和意义。
　　方法:变应性鼻炎小鼠模型成功建立后,用红细胞裂解液处理得到的外周血单个核细胞(PBMC)。CD4-Fitc和CXCR5-PE染色后用流式细胞仪分析检查外周血的CD4+CXCR5+细胞的比例,ELISA分析血清总OVA-sIgE水平,用统计学软件SPSS16.0作T检验和Pearson相关性分析。
　　结果:卵清蛋白激发AR模型组外周血中TFH细胞占外周血单个核细胞的百分比分别为7.94±2.66%、8.65±3.49%、9.77±3.24%,对照组为4.97±0.20%,经比较差异有显著性,前者明显高于后者(T-test,P<0.05);AR模型组之间的百分比随着免疫激发时间延长的而增加,经比较差异有显著性(T-test,P<0.05)。Pearson相关性分析显示TFH细胞的表达水平与总OVA-sIgE水平呈正相关(r=0.87,P=0.021)。
　　结论:TFH细胞在变应性鼻炎发病中有重要的作用,可能与IgE水平升高有关。
　　第三部分IL-21在变应性鼻炎小鼠模型中的表达及与TFH之间的关系
　　目的:探讨IL-21分子在变应性鼻炎小鼠模型中的表达及与OVA-sIgE、TFH细胞的关系。
　　方法:变应性鼻炎BALB/c小鼠造模成功后,ELISA法测试外周血IL-21、OVA-sIgE的量,流式细胞术分析TFH细胞在外周血单个核细胞中的含量,SPSS16.0中Pearson相关性分析IL-21分子与各组数据之间的联系,均数间的比较用T检验。
　　结果:IL-21在对照组为186.25±11.68pg/ml,AR模型1组为181.13±4.93pg/ml,AR模型2组为168.46±11.04pg/ml,AR模型3组为164.54±10.52pg/ml。各试验组和对照组小鼠外周血IL-21的表达经比较差异有显著性意义(T-test,P<0.05),试验组IL-21的表达水平要比正常组低,而且随着鼻内激发时间的延长,IL-21的表达水平逐渐下降;Pearson相关分析显示外周血IL-21的表达水平与CD4+CXCR5+T细胞比例呈负相关(r=-0.80,P=0.048),与血清总OVA-sIgE水平呈负相关关系(r=-0.86,P=0.031)。
　　结论:IL-21与TFH细胞及OVA-sIgE的含量呈负相关,临床上可能对变应性鼻炎有一定的治疗作用。
　　第四部分TFH相关因子在变应性鼻炎小鼠模型鼻黏膜中的表达
　　目的:探讨TFH相关因子CXCR5及Bcl-6在变应性鼻炎小鼠模型鼻粘膜中的表达及可能意义。
　　方法:小鼠变应性鼻炎模型造模成功后,用免疫组织化学方法分析CXCR5在小鼠鼻黏膜中的表达情况。并用Westernblot和PCR的方法对TFH关键转录因子Bcl-6进行分析,数据用医学统计学软件SPSS16.0处理及比较。
　　结果:Westernblot测试显示TFH关键转录因子的表达在实验组鼻黏膜明显升高,其相对密度值分别为0.67、0.84、0.98,而对照组鼻黏膜为0.53。鼻黏膜适时荧光定量PCR检测显示Bcl-6mRNA的表达也明显增高,其扩增倍数分别为1.63、1.77、1.85、1.92,而对照组鼻黏膜为0.90(T-test,P<0.05)。鼻黏膜CXCR5免疫组织化学分析的结果显示实验组鼻黏膜CXCR5+细胞数比对照组鼻黏膜中CXCR5+细胞数明显增多(T-test,P<0.05),广泛分布在粘膜及粘膜下层中。且随着鼻内激发时间的延长表达增多。
　　结论:变应性鼻炎小鼠鼻粘膜中CXCR5及Bcl-6表达明显增强,可能参与了变应性鼻炎的发病过程。

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第一部分 变应性鼻炎小鼠模型的建立

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 TFH细胞在变应性鼻炎小鼠模型外周血中的流式细胞分析前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 IL-21在变应性鼻炎小鼠模型中的表达及与TFH之间的关系

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第四部分 TFH相关因子在变应性鼻炎小鼠模型鼻黏膜中的表达前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

综述

附录

致谢