课题一 原发性干燥综合征患者TCR-ζ链的初步研究;课题二 抗α胞衬蛋白抗体在干燥综合征中的临床研究

摘要

背景：
　　原发性干燥综合征(primarySj?grensyndrom,pSS)是一种常见的自身免疫性疾病,患病率大约为0.5％-5%。pSS发病隐匿,与大多数自身免疫性疾病类似,患者绝大多数为女性。pSS病程中可累及多个脏器,患者的临床表现常因年龄、性别以及地理环境的差异性而有所不同。pSS患者可出现口腔、眼部、气管、皮肤等部位的干燥症状,也可有肌肉骨骼(关节痛和一过性滑膜炎等),肺部(呼吸困难、肺部炎症等),肾脏(远端肾小管酸中毒等),消化道(吞咽困难、萎缩性胃炎等),肝脏(自身免疫性肝炎等),血管(过敏性血管炎、坏死性血管炎等),神经系统(周围神经病变等),淋巴组织(甚至并发淋巴瘤)等全身多个组织器官的损伤。pSS的临床治疗主要以对症支持治疗为主,效果欠佳。pSS的发病机制尚不明确,既往的研究通过动物模型提供了一些认识:1)较强的遗传因素;2)T细胞驱动的炎性细胞浸润或淋巴细胞浸润;3)病毒感染;4)特异性抗体的产生;5)调节细胞凋亡的基因影响了慢性淋巴细胞浸润。以上原因中,T/B细胞的异常活化是pSS特征性的免疫病理改变。寻找T/B细胞异常活化的关键点对于治疗及影响pSS疾病转归具有重要的意义。研究显示,TCR-ζ链(Tcellreceptor-ζchain,CD247)的表达和功能改变与慢性炎症和自身免疫性疾病有关,TCR-ζ链在T细胞的活化过程中起到重要作用,那么TCR-ζ链的水平高低能否反映pSS疾病的进展情况,调节TCR-ζ链的水平能否延缓甚至逆转pSS的病理过程呢?本研究采用T淋巴细胞细胞系和pSS患者外周血作为研究对象,拟在探讨TCR-ζ链在T细胞系中的调控机制及其在pSS患者体内的表达水平,并通过与临床其他检测指标的联合统计分析,观察TCR-ζ链在pSS疾病发生发展过程中发挥的作用。希望通过对TCR-ζ链的初步研究,为进一步深入寻找pSS疾病发生发展的关键靶点提供一定的理论基础与科研证据。
　　目的：
　　1、利用T淋巴细胞系----Jurkat细胞,检测CD3单克隆抗体刺激前后Jurkat细胞中TCR-ζ链的水平,初步探讨其作用机制;
　　2、检测pSS患者组与正常对照组外周血中TCR-ζ链及炎性细胞因子----白介素33(Interleukin-33,IL-33)的水平,对比两组之间的差异,并且分析TCR-ζ链与IL-33及其他临床常用指标之间的关系,寻找其与疾病活动度的相关性,探讨TCR-ζ链的临床意义。
　　方法：
　　1、TCR-ζ链在T淋巴细胞系中调节机制的初步研究
　　利用T淋巴细胞系----Jurkat细胞系作为刺激实验的细胞模型,通过免疫印迹技术(WesternBlot,WB)检测在CD3单克隆抗体刺激前后,Jurkat细胞中TCR-ζ链的水平。利用灰度检测进行统计学分析。
　　2、TCR-ζ链在pSS患者外周血中水平的检测
　　将pSS患者组及正常对照组的外周血进行处理后,行流式细胞术(Flowcytometry,FCM),从细胞水平分析外周血T淋巴细胞中TCR-ζ链(CD3+CD247+细胞)的含量;利用实时定量聚合酶链式反应(Realtimepolymerasechainreaction,RT-PCR)法,从mRNA水平对外周血中TCR-ζ链进行检测。最终将结果进行统计学分析,相对表达量用±SD值表示。
　　3、pSS患者外周血中炎性因子IL-33水平的检测以及TCR-ζ链与临床指标的相关性研究
　　收集pSS患者组及正常对照组外周血,通过酶联免疫吸附法(Enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)法测定两组血清中IL-33的表达水平,并进行统计学分析。将TCR-ζ链、血清IL-33检测结果、pSS患者临床常用检测指标(包括血沉、血清免疫球蛋白、血清补体)进行分组对比分析或相关性统计学分析。借此观察TCR-ζ链与临床指标之间的相关性,进一步探索TCR-ζ链的临床意义。
　　结果：
　　1、将WB检测结果进行灰度检测,同一时间点CD3单克隆抗体刺激组较非刺激组TCR-ζ链含量降低,其中24h时间点两组之间的差异较12h时间点两组之间的差异更大,具有显著统计学意义(P<0.01)。表明在CD3单克隆抗体的刺激下,随着时间的增长Jurkat细胞中TCR-ζ链水平逐渐降低,提示TCR-ζ链在T细胞异常激活中可能起到调节作用。
　　2、本部分研究共包括pSS组患者42例,男性2例,女性40例,年龄19~65岁,平均年龄45.0±10.6岁;正常对照组41例,男性3例,女性38例,年龄27~58岁,平均年龄40.8±6.5岁。两组年龄比无统计学差异(P>0.05)。FCM检测pSS患者组外周血中CD3+CD247+细胞(TCR-ζ链)比例占40.7±30.1(%),正常对照组比例为57.1±17.8(%)。统计学分析显示,pSS患者组TCR-ζ链水平较正常对照组低,且两组之间存在显著性差异(P<0.01)。通过RT-PCR验证,pSS组TCR-ζ链的相对表达量为0.2±0.1,正常对照组TCR-ζ链的相对表达量为1.0±0.6。pSS患者组TCR-ζ链的相对表达量低于正常对照组,两组△Ct值之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　3、本部分研究共检测pSS组患者42例,平均年龄45.0±10.6岁,IL-33水平130.4±72.3(pg/ml),正常对照组16例,平均年龄40.2±6.6岁,IL-33水平72.4±40.6(pg/ml)。两组进行组间对比,年龄差异无统计学意义(P>0.05)。pSS组患者血清IL-33的水平高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。将pSS组根据血沉的数值(Erythrocytesedimentationrate,ESR)、血清免疫球蛋白(Immuneglobulin,Ig,包括IgG、IgA、IgM)的表达水平以及血清补体(Complementinbloodserum,C,包括C3、C4)的表达水平异常与否进行分组后进行组间对比以及相关性分析。结果显示:外周血TCR-ζ链与血清IL-33水平之间无明显相关性。血沉升高组IL-33水平高于血沉正常组(P<0.05);IgG升高组IL-33水平高于IgG正常组(P<0.05),C3降低组IL-33水平高于C3正常组(P<0.05)。
　　结论：
　　1、通过利用Jurkat细胞系行体外刺激实验提示,CD3单克隆抗体刺激与T细胞的激活、TCR-ζ链水平的改变有直接联系。在异常刺激下,T细胞异常活化,TCR-ζ链水平随着时间的延长而降低。
　　2、pSS的发病过程是免疫紊乱导致T/B细胞的异常活化,而TCR-ζ链在T细胞异常活化过程中起到重要的链接作用。通过FCM检测pSS患者组及正常对照组外周血中TCR-ζ链的水平,发现pSS患者组TCR-ζ链较正常对照组降低,两组之间存在显著统计学差异,说明TCR-ζ链在pSS的疾病发生过程中,不仅参与T细胞的异常活化,亦可能与其病理改变过程相关。
　　3、ELISA法验证IL-33可能参与pSS疾病发生发展过程中的炎症反应。通过检测pSS患者组及正常对照组血清中IL-33水平,完善临床资料,将临床上用于pSS疾病的常用指标进行对比分析。通过统计发现,IL-33水平与血沉、血清IgG水平、血清C3水平可能相关。TCR-ζ链水平与IL-33水平两者无明显相关性。
　　第二部分
　　背景：
　　干燥综合征(SS)是一种慢性的,侵犯外分泌腺为主的,并可伴有多系统损害的炎症性自身免疫病。SS的发病率很高。一直以来干燥综合征在临床上缺乏理想的特异性很高的血清学诊断方法,患者在行唇腺活检等有创检查时依从性较差,加上该病起病隐匿,社会认识不足以及其缺乏典型症状等均导致干燥综合征的临床诊断一直是一个难题。目前在自身抗体的血清学诊断中,抗核抗体ANA、抗SSA抗体及抗SSB抗体等虽然对干燥综合征的诊断有一定意义,但是敏感性和特异性并不理想。近年来,国内外的研究均表明α-胞衬蛋白与干燥综合征的发病有关,且更有研究表明抗α-胞衬蛋白抗体(anti-α-fordrinpolypeptideantibody)是干燥综合征的特异性抗体。那么抗α-胞衬蛋白抗体的特异性和敏感性如何?在诊断SS的临床工作中,我们应当怎样更好的联合应用各项检查来更快的明确诊断呢?带着这样的问题,我们进行了干燥综合征中抗α-胞衬蛋白抗体的相关临床研究。
　　目的：
　　探讨抗α-胞衬蛋白抗体在检测在干燥综合征诊断中的意义,以加深临床上对抗α-胞衬蛋白抗体检测的了解并引起重视。
　　方法：
　　对在我院风湿免疫实验室进行抗α-胞衬蛋白抗体检测的105例住院病人的临床资料进行整理,并分干燥综合征组(SS组)、干燥综合征合并其他结缔组织病组(合并CTD组)、单纯其他结缔组织病组(其他CTD)和非结缔组织病组(非CTD组)四组进行统计学分析。
　　结果：
　　抗α-胞衬蛋白抗体检查在干燥综合征患者中特异度67.1%,灵敏度40%,特异度均高于抗SSA抗体(35.7%)和抗SSB抗体(61.4%),灵敏度均低于抗SSA抗体(85.7%)和抗SSB抗体(71.4%)。对比四组之间,抗SSA抗体(P<0.01)、抗SSA抗体(P<0.01)、ENA谱(P<0.01)、IgA(P<0.05)以及唾液腺ECT(P<0.01)检测结果的差异性具有统计学意义。同时将抗α-胞衬蛋白抗体检测结果与抗SSA抗体、抗SSA抗体和(或)唾液腺ECT检测结果联合考虑,结果提示组间差异也有统计学意义(1P<0.01,2P<0.05)。
　　结论：
　　抗α-胞衬蛋白抗体的检测对于干燥综合征诊断的特异性高于抗SSA抗体和抗SSB抗体,但其灵敏度均不及抗SSA抗体和抗SSB抗体。唾液腺ECT的检查对于干燥综合征的诊断具有重要的参考意义,较有创性的唇腺活检更易实施。唇腺组织病理学检查仍是公认的诊断干燥综合征的金标准。联合多项自身抗体检测的结果更有助于干燥综合征的诊断,更早确诊,加以治疗。

目录

封面

声明

目录

课题一 原发性干燥综合征患者TCR-ζ链的初步研究

中文摘要

英文摘要

前言

参考文献

第一部分TCR-ζ 链在T淋巴细胞系中调节机制的初步研究

1. 材料方法

2 结 果

3 讨 论

参考文献

第二部分TCR-ζ 链在原发性干燥综合征患者体内水平的初步探讨

1 材料方法

2 结 果

3 讨 论

参考文献

第三部分TCR-ζ链与常用临床指标的相关性研究

1材料方法

2 结 果

3 讨 论

参考文献

课题二干燥综合征诊断中抗α胞衬蛋白抗体的临床研究

中文摘要

英文摘要

1 材料方法

2 结 果

3 讨 论

参考文献

总结

综述

常用英文缩略词及注释

致谢

附 件1

附 件2