MEK抑制剂增强肝癌多药耐药细胞化疗敏感性的研究

摘要

目的：探讨MAPK信号传导通路与肝癌多药耐药性之间的关系
　　方法：CCK-8法测定HepG2/ADM的耐药性及MEK抑制剂U0126处理HepG2/ADM后细胞对化疗药物敏感性的影响,流式细胞术对比检测其凋亡率,实时定量RT-PCR检测不同浓度U0126处理后的P-gp及MRP1的mRNA的表达,Westernblotting检测HepG2/ADM及亲本细胞HepG2多药耐药蛋白的表达情况及不同浓度U0126处理后耐药蛋白PGP和MRP1的表达情况。
　　结果：CCK-8检测HepG2/ADM不仅对ADM产生耐药(RI:27.77),而且对其他化疗药产生耐药。U0126(20umol/L)干预HepG2/ADM后,其IC50明显下降.和亲本HepG2细胞相比,HepG2/ADM中MDR1mRNA及MRP1mRNA的表达是HepG2的5.37倍和6.14倍,不同浓度的U0126处理耐药株细胞后mRNA的表达量明显下降。进一步检测P-gp蛋白及MRP1的表达发现,表达量是亲本细胞的2.68及2.76倍,不同浓度的U0126处理耐药株细胞后蛋白的表达量均下降,并呈浓度依赖性。
　　结论：本实验证明MEK抑制剂U0126可以通过下调P-gp和MDR1的表达增强耐药肝癌细胞对化疗药物的敏感性。联合MEK抑制剂和传统化疗药物可能为耐药肝癌细胞的治疗提供新的治疗前景。

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引言

材料和方法

一、 实验材料

二、 实验方法

1. 细胞的复苏、培养及传代

2. CCK-8法检测HepG2/ADM细胞的耐药性及对化疗药物的敏感性

3. 流式细胞术检测不同浓度的U0126对HepG2/ADM细胞凋亡的影响

4. 实时定量PCR检测MDR1及MRP1的mRNA的表达

5. Western blotting检测耐药蛋白P-gp及MRP1的表达

5．统计学分析

结果

1．HepG2细胞和HepG2/ADM的耐药性及U0126处理后对化疗药物的敏感性测定

2. 流式细胞术检测不同浓度的U0126对HepG2/ADM细胞凋亡的影响

3.U0126对HepG2/ADM细胞的MDR1和MRP1mRNA表达的影响

4. U0126对HepG2/ADM细胞的P-gp和MRP1蛋白表达的影响

讨论

参考文献

综述

附录 攻读硕士学位期间参与发表的学术论文

致谢