脂肪干细胞来源的生长因子对皮肤成纤维细胞迁移和增殖的影响

摘要

背景:
　　脂肪干细胞条件培养液(adipose stem cell-conditioned medium,ASC-CM)中富含各类脂肪干细胞(adipose stem cells,ASCs)来源的细胞因子。目前研究证实,ASC-CM可以促进皮肤创伤修复,皮肤成纤维细胞是一类几乎参与整个创伤修复过程的重要效应细胞,其迁移与增殖是创伤修复首要的关键环节。
　　目的:
　　研究ASC-CM中表皮生长因子(EGF),血小板源性生长因子(PDGF),血管内皮生长因子(VEGF),成纤维细胞生长因子(bFGF)在创伤愈合过程中对皮肤成纤维细胞迁移和增殖的作用机制。
　　方法:
　　(1)采用蛋白芯片技术,检测ASC-CM中包括EGF、PDGF、VEGF以及bFGF在内的507种细胞因子的含量(信号值,SV);(2)采用划痕实验和transwell小室迁移实验,在ASC-CM中分别加入0、1、10、20、50、100ng/ml浓度的EGF、PDGF、VEGF和bFGF,上述各因子的中和抗体,及上述单一因子诱导皮肤成纤维细胞迁移24h后,检测其迁移率;(3)采用CCK-8实验,诱导皮肤成纤维细胞增殖3d后,检测其增殖率,分组同上。
　　结果:
　　(1)ASC-CM中EGF(SV=458.0)、PDGF(SV=363.5)、VEGF(SV=360.5)、以及bFGF(SV=389.5)信号值均大于300;(2)相较于单一因子,ASC-CM对成纤维细胞的迁移有明显的促进作用。其中,PDGF、VEGF和bFGF对细胞迁移的促进作用显著,且随着浓度的上升而增加,PDGF在50ng/ml时、VEGF在20ng/ml时、bFGF在20ng/ml时达到各自的平台期;在ASC-CM中分别加入PDGF、VEGF和bFGF的中和抗体后,促进作用可被明显抑制;(3)相较于单一因子,ASC-CM对成纤维细胞的增殖有明显的促进作用。其中,EGF和bFGF对细胞增殖的促进作用显著,且随着浓度的上升而增加,并分别在50ng/ml和20ng/ml时达到平台期;在ASC-CM中分别加入EGF和bFGF的中和抗体后,促进作用可被明显抑制。
　　结论:
　　相较于单一因子,ASC-CM可明显促进皮肤成纤维细胞的迁移和增殖,其中所含有的PDGF、VEGF和bFGF对细胞迁移促进作用非常明显,且具有浓度依赖性;EGF和bFGF对细胞增殖促进作用非常明显,且具有浓度依赖性。因此ASC-CM对皮肤创伤修复的促进作用优于单一因子;同时,在应用ASC-CM时应注意选择适宜的细胞因子浓度,可更有效地促进成纤维细胞的迁移和增殖。

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封面

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中文摘要

英文摘要

前言

实验材料

一、实验试剂

二、实验仪器

三、主要器材

实验方法

1. 研究对象

2. 样品采集

3. 皮肤组织的处理、人皮肤成纤维细胞的分离、培养

4. 脂肪组织的处理、人脂肪干细胞的分离、培养

5. 成纤维细胞、人脂肪干细胞的传代

6. 成纤维细胞、人脂肪干细胞的冻存

7. 人脂肪干细胞表面标记物的流式鉴定

8. 人脂肪干细胞向成脂肪细胞的诱导与染色

9. 人脂肪干细胞向成骨细胞的诱导与染色

10. 人脂肪干细胞条件培养液（ASC-CM）的制备和蛋白芯片检测

11. transwell小室迁移实验

12. 划痕实验

13. CCK-8增殖实验

14. 统计分析

实验结果

1. 原代细胞培养与鉴定

2. ASC-CM蛋白芯片分析：

3. transwell小室迁移实验

4. 划痕实验

5. CCK-8增殖实验

讨论与结论

附图

参考文献

综述

参考文献

致谢

附录