Calpain-Akt信号通路在哮喘气道平滑肌重建中的作用

摘要

目的:
　　探讨钙蛋白酶(calpain)以及其下游的PI3K/Akt信号通路在气道炎症导致的哮喘气道平滑肌重建中的作用。
　　方法:
　　以卵清蛋白被动致敏的方法复制小鼠慢性支气管哮喘气道重构的模型,并腹腔注射calpain抑制剂calpeptin,检测肺组织calpain活性,并用Masson染色检测支气管胶原含量以及平滑肌厚度。用哮喘相关细胞因子IL-4,IL-5和TNF-α处理原代培养支气管平滑肌细胞,检测calpain活性,Westernblot方法检测Ⅰ型胶原和磷酸化的Akt(p-Akt)的蛋白表达,以及BrdU-ELISA方法检测平滑肌细胞增殖。同时用calpain抑制剂MDL28170、PI3K抑制剂LY294002分别阻断calpain、Akt信号,进一步证实该通路在胶原生成和细胞增殖中的作用。
　　结果:
　　哮喘小鼠肺组织calpain活性明显高于对照组,Masson染色结果显示支气管有明显的胶原沉积以及平滑肌增厚,而使用calpain抑制剂的哮喘+calpeptin组小鼠肺组织calpain活性低于哮喘组,而且胶原含量和平滑肌层厚度均低于哮喘组。哮喘细胞因子IL-4,IL-5及TNF-α处理,均可促使气道平滑肌细胞calpain活性增加、细胞增殖以及Ⅰ型胶原和p-Akt表达。Calpain抑制剂MDL28170抑制Akt的磷酸化(p-Akt),而且,MDL28170及PI3K抑制剂LY294002均可减轻哮喘细胞因子引起的细胞增殖和Ⅰ型胶原表达。
　　结论:
　　Calpain在支气管哮喘气道平滑肌细胞重建中起重要作用,calpain活化PI3K/Akt信号通路是其机制之一。

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中英文对照缩略语

中文摘要

英文摘要

前言

实验材料

（一）.实验动物

（二）.主要试剂

（三）.主要仪器

（四）.试剂配制

实验方法

（一）.动物模型

（二）. Masson 染色检测胶原纤维含量

（三）.肺组织calpain活性的测定[17]

（四）.大鼠支气管平滑肌细胞原代培养及处理

（五）.Western blot:

（六）.细胞calpain活性测定

（七）.细胞增殖检测

（八）.统计学分析

实验结果

一．Calpain抑制剂calpeptin减轻小鼠哮喘模型气道平滑肌重建

二． 哮喘相关细胞因子 IL-4，IL-5 和 TNF-α对原代培养的支气管平滑肌细胞calpain活性、I型胶原表达和细胞增殖的影响

三．Calpain通过活化PI3K/Akt信号通路介导哮喘相关细胞因子IL-4，IL-5和TNF-α引起的气道平滑肌重建

讨论

参考文献

综述

参考文献

致谢