低氧介导下HIF-1对ß-catenin表达的影响及在子宫内膜异位症发病机制中的作用

摘要

目的:
　　探讨低氧介导下HIF-1是否通过对β-catenin表达的影响参与子宫内膜异位症的发病机制。
　　方法:
　　第一部分,用transwell技术检测1％O2低氧及21%常氧环境中THESCs的侵袭能力变化;第二部分,经由不同时间低氧及常氧培养THESCs后,通过RealtimePCR和westernblot技术检测其HIF-1α和β-cateninmRNA和蛋白质的表达;第三部分,低氧与雌激素(17β-E2)同时刺激后THESCs,westernblot技术检测其表达HIF-1α和β-catenin的变化;第四部分,脂质体liopfectamine2000转染HIF-1α质粒使其过表达和同法转染HIF-1α-SiRNA靶向阻断HIF-1α表达后,THESCs中HIF-1α和β-catenin的表达变化,并用免疫共沉淀(Co-IP)技术检测低氧及低氧和雌激素共同作用下HIF-1α和β-catenin的相互作用及表达变化。
　　结果:
　　一,低氧培养的THESCs侵袭性较常氧组明显增加;二,不同时间低氧处理后HIF-1α和β-cateninmRNA的表达均随时间的延长而降低,其中以1h表达量最高;低氧处理THESCsHIF-1α蛋白表达量增加,其中以4h表达量最多;相同时间点的β-catenin蛋白表达量也相应增加;三,低氧和雌激素同时刺激THESCs4h,HIF-1α和β-catenin蛋白表达显著增加;四,HIF-1αSi-RNA靶向沉默组与常氧组比较,HIF-1α蛋白表达无统计学差异,但β-catenin蛋白表达量低于转染组和低氧组,高于常氧组,推测HIF-1α沉默后对β-catenin有部分阻断作用。
　　结论:
　　HIF-1α可能通过部分影响β-catenin的表达而参与EMs的发病过程。

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引言

参考文献

实验材料与方法

一、材料

第一部分 THESCs在低氧与常氧刺激下的侵袭试验

一、组织来源及材料同前

二、实验方法：

1、T HESCs的培养：

2、T HESCs的传代：

3、T HESCs的冻存：

4、T HESCs的复苏：

5、T HESCs在低氧及常氧刺激下的侵袭实验：

6、统计学处理：

结果

第二部分 不同时间低氧及常氧刺激下对T HESCs表达HIF-1α和β-catenin的影响

1、T HESCs的培养及传代培养 ：同前。

2、低氧及常氧条件下刺激T HESCs不同时间：

3、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）：

4、免疫印迹法（Western blotting）检测HIF-1α和β-catenin蛋白的表达：

结果

第三部分 低氧与雌激素（17β-E2）同时干预对T HESCs表达HIF-1α和β-catenin的影响

1、T HESCs的培养及传代培养 ：同前。

2、低氧及雌激素同时刺激T HESCs：

结果

第四部分HIF-1α的过表达与沉默后HIF-1α与β-catenin的表达（HIF-1α质粒转染与SiRNA靶向阻断HIF-1α表达）

1. 提取质粒：

2. HIF-1α质粒的转染：

3、Si-RNA的转染：

4. 过表达及靶向沉默 HIF-1α基因后与低氧组和常氧组对照，用 western blot 检测HIF-1α和β-catenin mRNA的表达：

5. 免疫共沉淀：

结果

讨论

一．低氧环境下培养THESCs 的侵袭性明显增加

二．HIF-1α及β-catenin mRNA和蛋白表达

结论

综述

参考文献

致谢