高压氧对局灶性脑缺血再灌注成年大鼠海马齿状回神经干细胞增殖迁移分化的影响

摘要

目的:
　　利用高压氧在不同时间对局灶性脑缺血再灌注成年大鼠进行干预,观察海马齿状回神经干细胞增殖迁移及分化,探讨高压氧对局灶性脑缺血神经发生的影响。
　　方法:
　　60只成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、高压氧组、高压空气组、常压氧组。每组随机分为2天、3天、7天和14天四个亚组,每个亚组各3只。大脑中动脉栓塞再灌注(transient middle artery occlusion,tMCAO),栓塞80分钟后再灌注,栓塞2h后各治疗组动物开始治疗。高压氧组(2.5ATA,100％氧气,60min),高压空气组(2.5ATA,空气,60min),常压氧组(常压,100%氧气,60min),各组动物接受治疗每天1次,直到相应治疗时间结束。模型组和假手术组不接受任何治疗。手术第1,2天腹腔内注射BrdU标记增殖的细胞,于第一次治疗后标记,隔4小时一次,每天3次,连续2天。治疗结束后利用免疫组化荧光双重标记技术标记大脑双侧海马齿状回颗粒下区(SGZ)增殖细胞及其表型。荧光显微镜观察每侧SGZ随机5个视野,计数各类荧光双标细胞数。共聚焦显微镜拍照。统计学分析采用多组均数比较的方差分析,多重比较用SNK-q检验,方差不齐用Dunnett’s T3检验。
　　结果:
　　1.增殖的神经干细胞数(BrdU+/nestin+):高压氧组与其他四组在第2天(患侧),3天(患侧),7天(双侧)相比均有显著差异(P<0.05),且多于其他各组。高压氧组的患侧在第3天,增殖的神经干细胞数最多,第7天显著下降。第14天各组增殖的细胞(BrdU+)均未共表达神经干细胞标记物nestin,表明在第14天增殖的细胞已经经历分化。
　　2.增殖细胞分化为非成熟神经元(BrdU+/DCX+)细胞数:高压氧组在第2天(健侧),3天(患侧),7天和14天(双侧)与其他四组相比均有显著差异(P<0.05),且高压氧组多于其他各组。高压氧在第7天达高峰,第14天下降。
　　3.增殖细胞分化为神经胶质细胞(BrdU+/GFAP+)细胞数:高压氧组在第2天,14天(患侧)和各个时间点的健侧与其他四组比较均无明显差异。假手术组的患侧第3天(P<0.05),高压空气组的患侧第7天(P<0.05)与其他四组比较有显著差异,均高于其他四组。高压氧在各个时间点分化为神经胶质细胞的数目与其余四组相比均不增多。
　　结论:
　　高压氧治疗能显著提高脑缺血再灌注的成年大鼠海马齿状回颗粒下区(SGZ)神经干细胞增殖并向神经元方向分化迁移进入颗粒细胞层最终成为成熟颗粒细胞神经元并存活至少2周,且不促进向神经胶质细胞方向分化。

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英文缩略表

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前言

材料与方法

1. 实验材料

2. 实验动物分组

3．动物模型的制备及干预

结果

1. 双侧SGZ增殖的神经干细胞（图3）

2．双侧SGZ新生增殖细胞的分化

讨论

一、 关于HB O参数设定

二、 神经干细胞增殖、分化的检测

结论

展望与不足

参考文献

综述

参考文献

致谢