趋化因子CXCL10在骨癌痛大鼠脊髓背角CD8+T细胞增殖中的作用

摘要

目的:
　　探讨趋化因子CXCL10上调在骨癌痛大鼠脊髓CD8+T细胞增殖中的作用。
　　方法:
　　1、24只SPF级雌性SD大鼠，体重180～200g，采用随机数字表法，将大鼠分为假手术组（Sham组，n=9）和骨癌痛（CIBP组，n=15）。Sham组于大鼠右侧胫骨平台注射10μl灭活Walker256细胞，CIBP组于大鼠右侧胫骨平台注射10μl Walker256细胞。于造模前1d，后3rd、7th、14th、21std测量机械缩爪阈值（mechanical withdrawal thresholds，MWT）后于7th、14th、21std分别处死Sham组3只、CIBP组5只。取脊髓腰膨大部分，采用免疫荧光法，观测CD8+T细胞数量，并使用14thd大鼠脊髓切片进行CD8与CXCR3免疫荧光双标。
　　2、24只SPF级雌性SD大鼠，体重180～200g，采用随机数字表法，分为nave组、溶剂对照组和rrCXCL10组，每组8只。置管成功后第3d起，溶剂对照组及rrCXCL10组分别于鞘内注射10μl无菌生理盐水及rrCXCL10，并给予10μl无菌生理盐水冲管，1次/d。自给药起，每日于给药前测定MWT，观察MWT变化趋势，并于MWT趋于稳定后（第5d），处死取脊髓腰膨大部分，采用免疫荧光，Western blot法测定CD8+T细胞表达量。
　　3、24只SPF级雌性SD大鼠，体重180～200g，采用随机数字表法，分为CIBP组、CIBP+AMG487组和CIBP+20％HPβCD组，每组各8只。其中CIBP+AMG487组及CIBP+20％HPβCD组在造模前3d进行鞘内置管，从造模当天开始，分别鞘内注射10μl CXCR3抑制剂AMG487及AMG487溶剂20％HPβCD，并给予10μl无菌生理盐水冲管。1次/d，共14d。连续给药14d后，处死取脊髓腰膨大部分，采用免疫荧光，Western blot法测定CD8+T细胞表达量。
　　结果:
　　1、与Sham组相比，CIBP组MWT在7th、14th、21std明显下降；免疫荧光结果显示脊髓背角CD8+T细胞数明显增多(P<0.05)，并在14thd达到顶峰，21std逐渐降低。免疫荧光双标结果显示CD8与CXCR3共表达于同一细胞上。
　　2、与溶剂对照组相比，rrCXCL10组MWT在连续给药2d后，开始出现明显下降(P<0.05)，并在连续给药5d时趋于稳定。此时，脊髓背角CD8+T细胞数目明显增加。与nave组相比，溶剂对照组在测痛结果以及CD8+T细胞数目变化差异无统计学意义(P>0.05)。
　　3、与CIBP+20％HPβCD组相比，CIBP+AMG487组在连续给药14d后，免疫荧光与Western blot结果显示脊髓背角CD8+T细胞数目明显降低(P<0.05)。与CIBP组相比，CIBP+20％HPβCD脊髓背角CD8+T细胞数目变化无统计学意义(P>0.05)。
　　结论:
　　1、骨癌痛模型中，脊髓背角CD8+T细胞数目增多，并于14d达到顶峰；
　　2、骨癌痛模型中的CD8+T细胞可以表达CXCL10作用受体CXCR3；
　　3、通过在nave大鼠上使用重组大鼠CXCL10蛋白，使大鼠机械痛阈下调稳定后，脊髓背角CD8+T细胞数目增多；
　　4、通过抑制骨癌痛大鼠CXCR3受体，使大鼠脊髓背角CD8+T细胞数目减少；
　　综上：骨癌痛大鼠脊髓背角表达上调的CXCL10作用于CD8+T细胞上表达的CXCR3受体，使脊髓背角中CD8+T细胞数目增多。

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