嗜酸粒细胞增多性哮喘小鼠NK细胞亚群的动态分析及不同亚型哮喘小鼠模型的建立

摘要

目的：NK细胞在哮喘中的角色并不清楚。根据细胞表面CD11b和CD27分子，NK细胞可以分成不同亚群，这些细胞亚群在哮喘中的表型变化也未曾报道。另外，近年来临床上根据哮喘患者痰液中不同炎性细胞类型将哮喘分为不同亚型，而在建立相应哮喘动物模型方面尚有许多不足之处。本文旨在：1.通过观察小鼠肺组织中NK细胞亚群在嗜酸粒细胞增多性哮喘发生过程中的动态变化，同时检测哮喘发生后NK细胞的活性及分泌细胞因子水平，推测NK细胞在嗜酸粒细胞增多性哮喘中可能发挥的角色。2.通过建立不同类型哮喘的小鼠模型来模拟临床不同亚型的哮喘患者，从而为深入研究哮喘的发病机制提供帮助。
　　方法：利用卵清蛋白（OVA）诱导建立嗜酸粒细胞增多性小鼠哮喘模型，并在此基础上于不同时间点，使用不同剂量的LPS诱导中性粒细胞增多性以及混合粒细胞增多性小鼠哮喘模型；瑞氏-姬姆萨染色后于显微镜下观察并计数肺泡灌洗液（BALF）中不同细胞的数量；HE染色检测肺组织炎症程度；糖原（PAS）染色检测支气管杯状细胞分泌粘膜情况；ELISA技术检测 BALF中 Th1、Th2和Th17细胞因子以及血清中IgE和OVA-IgE水平；流式细胞术（FACS）检测NK细胞的比例、活性以及分泌细胞因子水平。地塞米松干预后观察以上指标变化。
　　结果：1.小鼠嗜酸粒细胞增多性哮喘发生过程中，肺组织中NK细胞占淋巴细胞的比例下降，其中CD11blowCD27low NK细胞和CD11blowCD27high NK细胞所占比例上升，而CD11bhighCD27high NK细胞和CD11bhighCD27low NK细胞比例下降。哮喘发生后，NK细胞数量增多、活性增强，且能够同时产生Th1和Th2细胞因子。尽管不同的NK细胞亚群都会分泌Th1和Th2细胞因子，但以CD11blowCD27low NK细胞分泌为主。2.嗜酸粒细胞增多性哮喘模型组小鼠BALF中嗜酸粒细胞比例、数量增多，Th2细胞因子水平升高；中性粒细胞增多性哮喘模型组小鼠BALF中中性粒细胞比例、数量增多，Th1和Th17细胞因子表达升高；混合粒细胞增多性哮喘模型组小鼠BALF中嗜酸粒细胞和中性粒细胞比例和数量都增多，Th1、Th2和Th17表达水平也都升高。各哮喘模型组小鼠都有不同程度的肺组织炎性细胞浸润和支气管粘液分泌，血清中IgE和OVA-IgE表达水平也有不同程度升高。用地塞米松干预后，各哮喘模型组小鼠BALF中的细胞比例、数量以及细胞因子表达水平的变化，肺组织炎症程度和支气管粘液分泌程度的变化，血清中IgE和OVA-IgE表达水平的变化，都证实该药物对嗜酸粒细胞增多性哮喘模型组小鼠具有良好的治疗效果，而对中性粒细胞增多性和混合粒细胞增多性哮喘模型组小鼠的治疗效果不理想。
　　结论：1.在嗜酸粒细胞增多性哮喘发生过程中，尽管NK细胞并不是参与哮喘的主要淋巴细胞，但数量增多、活性升高，分泌更多细胞因子从而可能参与了哮喘疾病的发生。
　　2. CD11blowCD27low NK可能是NK细胞参与哮喘的主要细胞亚群。
　　3.所建立的不同类型的小鼠哮喘模型，能够很好地反映出临床相对应的亚型哮喘患者的病理特征，从而为进一步研究不同亚型哮喘的发病机制并提出更具针对性的治疗方案打下基础。

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英文摘要

第一部分嗜酸粒细胞增多性哮喘小鼠NK细胞亚群的动态分析

前言

实验材料与方法

1. 实验材料

2. 实验装置

3. 实验方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分不同亚型哮喘小鼠模型的建立

前言

实验材料与方法

1 实验材料

2 实验装置

3 实验方法

实验结果

讨论

参考文献

综述

参考文献

致谢