APE1在拟老化大鼠模型蜗神经核中的表达研究

摘要

目的：初步探讨转录因子脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1（apurinic/apyrimidinic Endonuclease1）APE1和NF-E2相关因子2（nuclear factor erythroid2）Nrf-2在D-半乳糖诱导的拟老化大鼠模型蜗核中的表达功能。
　　方法：选取2月龄听功能正常的雄性健康Sprague-Dawley（SD）大鼠162只，随机分为两组，D-半乳糖拟老化组和对照组。D-半乳糖拟老化组：每日颈背部皮下注射D-半乳糖（500mg/Kg）一次，连续8周；NS对照组：每日颈背部皮下注射0.9％生理盐水（10ml/Kg）一次，连续8周。造模完成后，拟老化组和对照组再分为三个亚组：4月龄组（造模结束后0个月）、10月龄组（造模结束后6个月）6个月、16月龄组（造模结束后12个月），动物处死前听性脑干反应（ABR）检测大鼠听阈，处死时留取各组大鼠的蜗神经核组织。TUNEL染色检测蜗核细胞凋亡水平；尼氏染色检测蜗核神经元密度；通过Western blot和免疫组化染色检测APE、Nrf-2在蜗核中的蛋白表达含量。
　　结果：①ABR听性脑干测听的听力结果显示：相同月龄、相同频率（4kHz、8kHz、16kHz、24kHz、32kHz）拟老化组和对照组比较，阈值差异无统计学意义（P>0.05）。②TUNEL染色结果显示：4月龄时，拟老化组和对照组凋亡水平无明显差异；10月龄和16月龄时，拟老化组和对照组相比，凋亡增加（p<0.05）。③尼氏染色结果显示：4月龄和10月龄时，拟老化组蜗核神经元细胞的密度与对照组相比无显著变化，而16月龄时，拟老化组神经元密度降低（p<0.05）。④Western blot结果显示：各时间点Nrf-2蛋白在拟老化组的表达较对照组显著降低（p<0.01）；4月龄时APE1蛋白在拟老化组和对照组的表达差别没有统计学意义，10月龄和16月龄时APE1蛋白在拟老化组的表达较实验组下降（p<0.01）。⑤免疫组化结果显示：Nrf-2蛋白在各时间点拟老化组的表达均较对照组降低；APE1蛋白在4月龄时拟老化组和对照组表达无差异，10月龄及16月龄时，拟老化组表达降低。
　　结论：1.高剂量D-半乳糖导致蜗神经核神经元密度下降、凋亡数目增多，加速了蜗神经核细胞的衰老。2.蜗神经核Nrf-2及APE1表达水平在拟老化大鼠蜗神经核组织中发生了不同程度的变化，可能参与了蜗核神经元细胞的凋亡水平的增加，从而加速蜗神经核的老化。

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英文缩略词表

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前言

材料和方法

一． 实验对象

二、实验试剂与仪器

三．主要液体配制

四、试验方法

结果

1. ABR（听性脑干反射）阈值

2.凋亡细胞在蜗神经核D-半乳糖拟老化组的变化

3.神经元密度变化

4. Western Blot检测APE1、Nrf-2蛋白在蜗神经核的表达变化

5.免疫组化染色检测Nrf-2、APE1蛋白在蜗神经核的表达

讨论

结论

参考文献

综述:APE1/Ref-1参与的蛋白质相互作用对氧化还原的调节

致谢