巨噬细胞分泌的IL-6通过WNT/β-catenin通路促进结肠癌细胞的侵袭转移

摘要

巨噬细胞是人类固有免疫细胞中的一种，在人类肿瘤组织中常有较大量的分布，并可通过分泌多种细胞因子、趋化因子等蛋白类物质，参与人类肿瘤的进展。IL-6作为巨噬细胞分泌的一种细胞因子，可以通过多种信号通路影响肿瘤的进展，包括肿瘤的侵袭转移。本论文通过研究巨噬细胞及其分泌的细胞因子IL-6与人类结肠癌细胞系侵袭转移之间关系，了解巨噬细胞分泌的IL-6在人结肠癌细胞系侵袭转移过程中的作用及其机制。本论文涉及的主要研究内容及结果如下：
　　一、巨噬细胞及其分泌的IL-6与人结肠癌的关系
　　通过对华中科技大学同济医学院附属同济医院保存的正常人类结肠组织、人类结肠癌原发灶及淋巴结转移灶的切片各5例进行免疫组织化学染色，我们发现CD68+的巨噬细胞在正常结肠组织中数量较少，而在结肠癌原发灶和淋巴结转移灶中均明显增加。同时，结肠癌原发灶及淋巴结转移灶组织中的IL-6分泌量较正常人类结肠组织明显增加。这提示人结肠癌的恶化和侵袭转移可能与巨噬细胞和IL-6相关。
　　二、巨噬细胞及其分泌的IL-6与人结肠癌细胞侵袭转移的关系
　　通过划痕实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验，验证了巨噬细胞分泌的上清增强了人结肠癌细胞系SW48的侵袭和转移能力；同时，通过中和巨噬细胞上清中的IL-6，我们观察到实验组的人结肠癌细胞系SW48的侵袭转移能力明显减弱。上述实验共同反映了巨噬细胞分泌的IL-6可以促进人结肠癌细胞的侵袭转移。
　　三、IL-6促进结肠癌细胞侵袭转移的机制
　　通过Western Blot可以验证，随着巨噬细胞分泌的上清与人结肠癌细胞系SW48共同培养时间的延长，24h内SW48分泌的Vimentin、β-catentin等促进肿瘤细胞侵袭转移的相关蛋白的表达量明显增加，其中12h时表达量最高；而中和巨噬细胞上清中的IL-6后，Vimentin、β-catentin等促进细胞侵袭转移的相关蛋白的表达量受到明显抑制。这反映了巨噬细胞分泌的IL-6可以提高人结肠癌细胞的侵袭转移能力。
　　我们分别提取用巨噬细胞上清培养的人结肠癌细胞系SW48在不同时间点的细胞蛋白，进行Western Blot以了解IL-6促进人结肠癌细胞侵袭转移的具体机制。结果显示：蛋白p-STAT3、p-ERK表达的增高在共同培养15min后最明显，提示IL-6可能是通过IL-6/IL-6R信号通路发挥促结肠癌细胞侵袭转移作用的。
　　综上所述，我们通过对组织切片及对人结肠癌细胞系SW48的体外研究，其结果显示巨噬细胞分泌的IL-6可以通过WNT/β-catenin通路促进人结肠癌细胞的侵袭转移，这对于认识结肠癌发生发展机制以其治疗的相关探讨提供了实验依据。

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中文摘要

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前言

材料与方法

实验材料

实验方法

实验结果

1. 免疫组化法检测组织切片中CD68和IL-6的分布和表达情况

2. PMA诱导的THP-1细胞分化

3. CBA结果

4. 细胞迁移、侵袭实验结果

5. 中和IL-6后的Transwell迁移实验

6. Western Blot检测侵袭相关蛋白Vimentin、β-catentin的表达水平

7. Western Blot检测中和IL-6后Vimentin和β-catentin的表达量

8. Western Blot检测IL-6/IL-6R信号通路中p-STAT3和p-ERK的表达情况

9. 统计学分析

讨论

一、TAM在肿瘤发生和发展中扮演着重要角色

二、EMT相关指标的表达及意义

三、巨噬细胞分泌的IL-6上调p-STAT3和p-ERK

小结

参考文献

综述: 巨噬细胞在肿瘤进展过程中的作用

英文缩略词表

致谢