非综合征型耳聋与线粒体基因突变荟萃分析及相关突变筛查研究

摘要

听力损失是一种比较常见的听力缺陷疾病，给患者的正常生活带来了极大的不便，同时给家人和社会带来了巨大的经济压力。据报道，近60％先天性耳聋的发生和遗传有紧密的联系，线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）突变是导致非综合征型耳聋（non-syndromic hearing loss，NSHL）的重要原因之一，且氨基糖苷类抗生素（aminoglycoside antibiotics，AmAn）的使用是mtDNA突变致聋的主要诱因，但目前对于哪些mtDNA突变位点与NSHL存在相关性还不是很清楚。目前，新生儿耳聋基因筛查日益广泛，通过筛查耳聋相关 mtDNA突变位点和其他基因相关突变位点，预防氨基糖苷类抗生素致聋（aminoglycoside antibiotics induced deafness，AAID）和迟发性听力损失的发生，进而降低耳聋的发生率。本文主要研究与NSHL和AAID显著相关的mtDNA突变位点并且进一步研究通过筛查这些mtDNA突变位点和其他已经明确的耳聋基因热点突变位点是否可以降低NSHL的发生率。
　　为了系统地分析已报道的mtDNA突变位点在不同种族中NSHL和AAID的相关性，本研究对43篇文献中的122个mtDNA突变位点与NSHL的相关性进行了评估,发现了8个位点与NSHL显著相关，其中7个位点（961ins/del，A1382C，A1555G，C1494T，G988A，A1557C，C1009T）位于MT-RNR1上，1个位点（G15927A）位于MT-TT上。6个位点（A1027G，A1555G，A839G，C1494T，T1095C，T1107C）与AAID显著相关。经RNA折叠模型分析和保守性分析，发现这6个位点在不同物种中高度保守且其中5个位点（A1555G，A839G，C1494T，T1095C，T1107C）可能位于12S rRNA基因AmAn的结合区，表明这些位点突变可能会导致12S rRNA结构变异，增强其与AmAn的结合，进而导致AAID的发生。
　　将荟萃分析鉴定的在亚洲人群中与NSHL和AAID显著相关的mtDNA位点（A1555G，C1494T）和已报道的在亚洲人群中与NSHL显著相关的突变位点(GJB2235delC，SLC26A4 A919G)纳入武汉地区新生儿耳聋基因筛查研究。采用荧光定量PCR方法结合测序法检测上述四个位点。本研究从66281例新生儿中筛查出2001例耳聋基因突变者，4位点总检出率为3.018%。根据本次的检测结果可以对携带基因突变的新生儿提早制定相应的干预措施，有助于降低武汉地区耳聋的发病率；建立了一套关于大规模耳聋基因筛查流程；继续跟踪携带基因突变的新生儿的耳聋发病情况以评估基因筛查的效益。
　　综上所述，本研究利用荟萃分析的方法探讨了mtDNA突变与NSHL和AAID的相关性，与NSHL和AAID显著相关的突变位点可以作为新生儿耳聋易感基因筛查的候选位点，进而将荟萃分析鉴定出的mtDNA A1555G和C1494T两位点纳入武汉地区新生儿耳聋基因筛查研究，进而通过大规模耳聋基因筛查，降低耳聋的发病率。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

1 绪论

1.1 耳聋的遗传特征

1.2 遗传性耳聋的相关研究

1.3 NSHL基因检测技术现状

1.4 遗传性NSHL治疗现状

1.5 研究内容及技术路线

1.6 研究目的和意义

2 MtDNA突变与NSHL的荟萃分析

2.1 引言

2.2 材料和研究方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 本章小结

3 武汉地区新生儿耳聋基因相关突变位点筛查研究

3.1 引言

3.2 试验材料

3.3 实验方法

3.4 样本复测及测序验证

3.5 结果

3.6 讨论

3.7 本章小结

4 总结与展望

4.1 总结

4.2 展望

致谢

参考文献

附录1 攻读学位期间发表的论文

附录2 英文缩写词表