毛细血管扩张共济失调突变基因对乳腺癌转移及化疗敏感性的影响

摘要

乳腺癌是妇女中最常见的癌症之一，在妇女新发癌症中约占30%，严重威胁着女性健康。乳腺癌分型众多，其组织形态及临床特点不尽相同，各具特点。而乳腺癌的远处转移及化疗抵抗是导致临床预后不佳的主要原因。研究乳腺癌转移及化疗抵抗的相关机制对临床治疗具有重要意义。
　　目的：研究毛细血管扩张共济失调突变基因（ATM）对乳腺癌转移及化疗敏感性的影响及分子机制。
　　方法：Transwell-migration/invasion法检测应用siRNA或小分子抑制剂抑制ATM后，乳腺癌细胞侵袭迁移变化。ELISA及免疫荧光法检测ATM抑制对乳腺癌细胞分泌免疫因子CCL2、IL-6的影响。Transwell-小室法检测CCL2中和抗体对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响。Transwell-小室法检测ATM/CCL2、ATM/IL-6通路在乳腺癌细胞侵袭迁移中的作用。Western blot法探究ATM调控CCL2分泌从而影响乳腺癌细胞侵袭迁移的机制。构建裸鼠三阴性乳腺癌 MDA-MB-231肺转移模型，免疫荧光法检测肺转移瘤组织中CCL2、IL-6的表达情况。CCK-8法检测ATM siRNA与化疗药物联用对乳腺癌细胞增殖抑制作用。构建裸鼠三阴性乳腺癌 MDA-MB-231原位移植瘤模型，采用纳米多孔硅微颗粒携载ATM siRNA（MSV/ATM），与化疗药物阿霉素联用，观察对肿瘤生长的影响。Ki67法检测肿瘤增殖情况。
　　结果：ATM siRNA及ATM抑制剂显著抑制乳腺癌细胞的侵袭迁移，同时乳腺癌细胞分泌CCL2也受到抑制。CCL2中和抗体可有效抑制MDA-MB-231的侵袭迁移。CCL2、IL-6可促进MDA-MB-231的侵袭迁移，若抑制ATM则作用被有效抑制。ATM抑制后Stat3 磷酸化程度降低，降低CCL2分泌，并下调AKT及其磷酸化，β-Catenin表达也受到抑制。在裸鼠人乳腺癌MDA-MB-231肺转移裸瘤结节处CCL2、IL-6表达较高。ATM siRNA可增强乳腺癌细胞对多种化疗药物及PARP抑制剂的敏感性；在乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型中，MSV/ATM与化疗药阿霉素也可明显抑制肿瘤组织生长。
　　结论：经由小干扰RNA和小分子抑制剂降低乳腺癌细胞中的ATM表达，可降低肿瘤细胞的侵袭转移。其分子机制可能是ATM调控Stat3磷酸化、AKT、AKT磷酸化和β-Catenin表达，降低趋化因子CCL2分泌。另外在体内外水平，ATM抑制均可有效增强乳腺癌的化疗敏感性。

目录

声明

缩略词表(Abbreviation)

第一部分ATM在乳腺癌侵袭与迁移中的作用

前言

实验材料与方法

1. 细胞株

2. 主要试剂

3. 动物来源

4. 实验仪器

5. 实验方法

实验结果

1. ATM抑制可影响乳腺癌细胞的侵袭、迁移

2. ATM对乳腺癌细胞免疫因子CCL2、IL-6分泌的影响

3. CCL2中和抗体对MDA-MB-231细胞侵袭迁移的影响

4. ATM调控CCL2、IL-6，促进乳腺癌细胞侵袭、迁移

5. ATM 通过磷酸化 Stat3 调控 CCL2 分泌，通过 AKT、p-AKT 和β-Catenin调控乳腺癌细胞侵袭转移

6. 乳腺癌肺转移瘤中高表达CCL2、IL-6

讨论

参考文献

第二部分ATM对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响

前言

实验材料与方法

1. 细胞株

2. 主要试剂

3. 动物来源

4. 实验仪器

5. 实验方法

实验结果

1. 抑制ATM可有效增敏三阴性乳腺癌细胞

2.应用纳米多孔硅微粒携载ATM siRNA，可增强阿霉素对肿瘤的生长抑制作用

讨论

参考文献

全文总结

创新点

综述:ATM在癌症中的研究进展

攻读硕士学位期间已发表论文

致谢