酒精与CaSR在肺动脉高压发生发展中的作用

摘要

目的：研究酒精诱导肺动脉收缩的机制。探究慢性酒精刺激能否诱导肺动脉高压。探讨钙敏感受体CaSR在酒精诱导的肺动脉血管收缩及肺血管重塑中的关键作用。
　　方法：原代培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)；用Fura-2/AM钙离子荧光探针和荧光成像系统检测细胞内的钙离子浓度；利用H2-DCFDA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)生成；shRNA基因干扰钙敏感受体(CaSR)的表达；构建lieber-DeCarli酒精大鼠模型；气相色谱仪检测大鼠血清的酒精浓度；CCK-8检测细胞增殖；Power lab四导生理记录仪监测大鼠离体肺动脉环的张力变化以及肺动脉压、体循环压、心输出量；western-boltting检测CaSR的表达；制作大鼠肺组织石蜡切片；HE染色；
　　结果：⑴梯度酒精刺激引起肺血管张力增加，在50mM-500mM浓度梯度中，张力增加比值呈二次项分布，且平滑肌源性收缩占总体收缩的70.3%。⑵离体实验中，酒精引起肺血管张力增加，同时Calhex231能抑制酒精引起肺血管张力增加。⑶将慢病毒包装的CaSR特异性干扰质粒，从SD大鼠尾静脉注射抑制CaSR蛋白的表达，SD大鼠离体血管对酒精刺激的收缩反应被抑制.⑷酒精刺激能够诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)内的游离钙离子增加，此过程依赖于细胞外钙。⑸酒精引起PASMCs细胞内游离钙离子升高,同时Calhex231，CaSR shRNA能抑制酒精引起的[Ca2+]i升髙。⑹酒精可诱导PASMCs ROS产生增加。⑺线粒体DNA剔除能够抑制酒精诱导的ROS生成以及胞质[Ca2+]i增加。⑻酒精促进肺动脉平滑肌的增殖。⑼在体实验中，长期慢性酒精饲喂的SD大鼠肺动脉压力增大、肺血管床阻力增大、右心室肥厚指数增加、肺动脉血管环增厚，而大鼠尾静脉注射Calhex231能抑制以上变化。⑽慢性酒精喂养大鼠的CaSR表达增加。
　　结论：酒精刺激肺动脉平滑肌细胞时，线粒体来源的ROS产生增加，增加的ROS促使CaSR的敏感性增强，促进细胞内的游离钙离子浓度增加，从而诱导肺动脉平滑肌收缩，并且此过程依赖于细胞外Ca2+的浓度。CaSR介导酒精刺激诱导的肺动脉血管环收缩以及大鼠肺动脉高压的产生。

目录

声明

引言

材料与方法

一、材料

二、方法：

三、统计学分析

实验结果和结论

一、肺动脉内皮和平滑肌都能接受酒精的刺激引发收缩反应

二、酒精诱导的肺动脉收缩能够被Calhex231抑制

三、CaSR基因下调抑制肺动脉对酒精的反应性收缩

四、离体肺动脉平滑肌细胞接受酒精刺激后细胞质内Ca2+浓度增加，此过程依赖于细胞外的Ca2+，并且此过程能够被Calhex231以及线粒体DNA剔除抑制

五、CaSR表达下调抑制酒精诱导的PASMCs胞质[Ca2+]i升高

六、活性氧(ROS)增强CaSR对细胞外Ca2+敏感性

七、酒精刺激促进肺动脉平滑肌细胞增殖

八、长期慢性酒精刺激能够诱导肺动脉高压

讨论

参考文献

综述：线粒体参与肺动脉高压的发生发展

致谢