巨噬细胞调控白血病干细胞分化影响CML疾病进展

摘要

目的：2005年以后,随着酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)的广泛应用,慢性髓系白血病(CML)患者的预后得到了很好的改善,部分患者甚至在长期坚持服药的前提下达到了完全分子学缓解(CMR),然而仍有一部分病人TKI治疗效果并不满意,疾病进展至加速期、急变期,为了探究这部分病人疗效不好的原因,以及达到CMR的患者骨髓内的基本状况,我们对骨髓微环境的免疫细胞进行研究,旨在找出两组患者骨髓微环境的差异.巨噬细胞是免疫系统的重要成分,其特点是可塑性、多态性,在不同的组织中有不同的表型,小鼠体内实验发现巨噬细胞的清除会影响干细胞的归巢.本研究通过建立两种细胞共培养的体系挖掘巨噬细胞与CML肿瘤细胞之间的关系,旨在探究、寻找CML患者BCR/ABL之外的治疗靶点,为临床上TKI治疗效果不理想的患者提供更多的选择. 方法：本研究中,我们收集不同治疗效果的CML病人骨髓,通过Ficoll分离法获取骨髓单个核细胞(BMMCs),通过M-CSF诱导实现人骨髓来源巨噬细胞的体外培养.获取巨噬细胞的上清,与人来源的CD34+细胞、细胞株K562共培养,从体内、体外两方面着手,观察肿瘤细胞生物学功能变化.利用流式细胞术检测巨噬细胞的差异表达、凋亡、周期上的改变,CCK8检测K562对伊马替尼的药物敏感性变化,Real-time PCR检测处理过的K562干细胞自我更新指标在mRNA水平变化,蛋白芯片技术检测不同治疗反应患者巨噬细胞上清的差异蛋白,初步探索效应产生的机制. 结果：和处在慢性期的CML患者以及非白血病患者(non-leukemia)相比,CML急变/发生事件(血小板上升或下降;白细胞升高;复发)的患者的全骨髓细胞表达更高的CD206(对照组0.3987%±0.5453%,n=7和实验组43.73%±25.28%,n=6).来自CML分子学完全缓解(CML-CMR)的患者巨噬细胞上清液促进了CD34+细胞的增殖(增殖倍数分别为2.07±0.52).CML-CMR患者来源巨噬细胞上清促进了K562干性基因的下调、集落形成能力的下降、皮下成瘤能力的下降,增强了K562对TKI的敏感性,但对其凋亡、衰老无明显差异. 结论：CML-CMR患者骨髓巨噬细胞通过分泌某种蛋白,产生对CML肿瘤细胞下调干性维持基因诱导分化的效应,而CML-BC以及发生事件的患者骨髓巨噬细胞对CML肿瘤细胞的干性维持基因没有下调作用,提示骨髓巨噬细胞可能和CML疾病的进展相关.

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