Wnt/β-catenin信号通路对TNF-α诱导的肺泡上皮细胞损伤的调控作用

摘要

目的：探索Wnt/β-catenin通路在急性肺泡上皮损伤过程中的作用，从而为急性肺损伤的治疗或研究提供新的方法和依据。 方法：1、培养A549细胞，待细胞长至约80%进行冻存留种、传代。2、采用第二至三代细胞进行实验，将细胞随机分为4组：（1）Control组：仅加入一定体积的无血清DMEM培养基；（2）TNF-α组：用浓度为100ng/ml的TNF-α处理细胞；（3）TNF-α+XAV939组：用含100ng/mlTNF-α和10ng/mlXAV939无血清DMEM培养基处理细胞；（4）XAV939组：用10ng/ml的XAV939处理细胞。3、通过免疫荧光技术检测细胞CTP的表达量从而判断细胞是否受到药物干预。用Western blot技术检测Wnt信号通路关键效应蛋白β-catenin、和炎症因子TNF-α的表达，用Rt-PCR检测Wnt信号通路关键效应蛋白β-catenin的基因水平变化。 结果：1、显微镜下细胞呈长梭形或多角形贴壁生长；2、免疫组化检测结果显示100ng/ml的TNF-α可诱导细胞产生的CTP减少。3、FCM检测结果显示100ng/ml的TNF-α可诱导细胞凋亡，且XAV939本身不会诱导细胞凋亡（P＜0.05）；4、TNF-α组的细胞凋亡与Control组和TNF-α+XAV939组相比明显上升，TNF-α组的β-catenin、TNF-α的蛋白表达水平和β-catenin的基因表达水平与Control组和TNF-α+XAV939组相比均明显上升（*P＜0.05）。 结论：Wnt/β-catenin通路参与到TNF-α诱导的A549细胞损伤过程，抑制Wnt信号通路可以减轻A549的损伤。

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