阿瑞匹坦对大鼠体内伊马替尼药动学影响及研究

摘要

目的： 探究止吐药NK-1受体拮抗剂阿瑞匹坦（APT）对伊马替尼（IMA）及其主要代谢物N-去甲基伊马替尼（N-D IMA）在大鼠体内药动学的影响，进一步阐明APT对IMA在大鼠体内的吸收、分布、代谢、排泄多过程多环节的作用机制。通过比较动物整体水平上口服与静注模型药动学结果，结合相关代谢酶与转运体的基因与蛋白表达量的差异作出判断，再运用肝胆总管引流模型及整体动物药物处置模型，进一步确证、完善猜想，全面而系统探究APT对IMA和N-D IMA在大鼠体内ADME行为变化的机制。为临床上进一步合理解释APT的药物-药物相互作用提供思路。 方法： 通过建立LC-MS/MS测定大鼠血浆、肝、肾、脑组织与胆汁中伊马替尼及其代谢物的方法，研究单次、连续3天灌胃APT及停药4天后对口服IMA和其代谢产物N-D IMA药动学影响，随后利用连续3天灌胃APT后静注IMA模型研究肠道吸收影响；并进一步利用RT-PCR和Westren blot技术探究肝脏中酶与转运体的mRNA转录水平与蛋白表达量的变化；通过大鼠肝胆总管引流模型，验证APT对IMA及其主要代谢物的胆汁排泄的影响；最后考察IMA及其代谢物在肝、肾、脑组织分布过程中浓度变化。 结果： 1.单次合并灌胃APT与IMA后，IMA的AUC0-t和AUC0-∞均升高约13%，N-D IMA下降了29.6%（P＜0.05）；连续三天口服APT后灌胃IMA，IMA的AUC0-t和AUC0-∞均下降约30%，CL升高43%（P＜0.05），而N-D IMA与空白对照组相比无统计学差异；经过停药后四天恢复期，IMA药动学行为恢复正常，与空白对照组无统计学差异；连续三天口服APT后静注IMA，IMA的AUC0-t和AUC0-∞均下降约23%，CL升高32%（P＜0.05），N-D IMA与空白对照组相比无统计学差异。 2.APT组的Cyp3a1与Abcb1的mRNA转录水平相对于空白对照组升高（P＜0.05），oct1、Slc22a5、Abcg2和Slco1b3无统计学差异。同时，APT组的Cyp3a1与P-gp蛋白表达量相对于空白对照组升高（P＜0.05）。 3.在APT组2-4小时时间段代谢物N-D IMA胆汁排泄速率加快，有统计学差异（P＜0.05），且8小时内的N-D IMA胆汁总排泄率相较于空白对照组提高了13.6%（P＜0.05），IMA则无统计学差异。 4.组织分布结果显示，在APT组中IMA在1.3h肝脏、10h肾脏、1.3h和10h脑与血浆浓度比有所升高（P＜0.05），N-D IMA则在1.3h和3h肝脏、10h肾脏、10h脑与血浆浓度比有所升高（P＜0.05）。其他时间点的比值与空白对照无统计学差异。 结论： 通过对基因与蛋白表达量测定结合胆汁排泄与组织分布结果，APT诱导Cyp3a1，使其表达量增加，活性增强，加快了IMA的在体内代谢生成更多的N-D IMA，同时诱导P-gp，加快了N-D IMA的分布与排泄，最终通过代谢与排泄协同作用影响了IMA口服与静注的药动学行为。本研究初步确认了APT对IMA与代谢产物N-D IMA药代动力学影响的原因，且阐明了APT对关键酶和转运体的影响，较为全面地探索了APT对IMA在大鼠体内的吸收、分布、代谢、排泄各环节的作用。为临床使用阿瑞匹坦提供参考，并对解释与阿瑞匹坦有关的相互作用提供思路。

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摘 要

ABSTRACT

引言

1 前言

2 实验材料

2.1 实验药品与试剂

2.2 主要设备

3 实验方法

3.1 LC-MS/MS测定大鼠血浆中伊马替尼及主要代谢物方法的建立

3.2 阿瑞匹坦对大鼠血浆中伊马替尼及主要代谢物药动学的影响

4 结果

4.1 LC-MS/MS测定大鼠血浆中伊马替尼及主要代谢物方法

4.2 伊马替尼及主要代谢物药动学结果

5 讨论

第二部分 阿瑞匹坦对大鼠体内部分代谢酶和转运体表达量的影响

1 前言

2 实验材料

2.1 实验药品与试剂

2.2 主要仪器设备

3 实验方法

3.1 RT-PCR技术检测目的基因mRNA转录水平

4 结果

4.1 阿瑞匹坦对目的基因mRNA水平表达影响

4.2 阿瑞匹坦对目的蛋白表达影响

5 讨论

第三部分 阿瑞匹坦对伊马替尼及主要代谢物大鼠胆汁排泄的影响

1 前言

2 实验材料

2.1 实验药品与试剂

甲磺酸伊马替尼

D1208A

大连美仑生物公司

N-去甲伊马替尼

J0378S

阿瑞匹坦

维拉帕米

利福平

吉非替尼

羧甲基纤维素钠

20160704

甲醇

MS1992-001

美国TEDIA公司

乙腈

I1218040

上海aladdin公司

2.2 主要仪器设备

3 实验方法

3.1 LC-MS/MS测定大鼠胆汁中伊马替尼及主要代谢物方法

3.2 伊马替尼对大鼠胆汁中伊马替尼及主要代谢物的影响

4 结果

5 讨论

第四部分 阿瑞匹坦对P-gp介导伊马替尼及主要代谢物分布的影响

1 前言

2 实验材料

2.1 实验药品与试剂

甲磺酸伊马替尼

D1208A

大连美仑生物公司

N-去甲伊马替尼

J0378S

阿瑞匹坦

维拉帕米

吉非替尼

利福平

甲醇

MS1992-001

美国TEDIA公司

乙腈