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LncRNA MIAT通过miR--149--5p靶向调控CD47导致巨噬细胞胞葬障碍促进动脉粥样硬化斑块不稳定的机制

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目录

声明

缩略词对照表

前言

参考文献

第一部分 LncRNA MIAT促进动脉粥样硬化斑块不稳定

材料和方法

1. 医学伦理声明

2. 材料

3. 患者入选与排除标准

4.颈动脉超声检查

5.MRI仪器及检查方法

6. 动脉粥样硬化斑块MR分型

7.动脉粥样硬化动物模型建立及分组干预

8.小鼠血样采集

9.小鼠主动脉分离处理

10.血浆采集与存储

11.外周血浆及小鼠斑块中LncRNA MIAT的提取和检测

12.数据统计分析

结果

1. 研究对象临床资料

2.我们通过彩色超声对研究对象的颈动脉进行初筛

2.通过彩色超声对颈动脉进行初筛后,发现有颈动脉斑块的研究对象进行颈动脉MR扫描检查

4.伴有不稳定动脉粥样硬化斑块的患者血清LncRNA MIAT水平升高

5. 高脂饮食饲养 16周(23周龄)的 ApoE-/-小鼠构建进展期动脉粥样硬化模型,其血浆和斑块组织中LncRNA MIAT表达升高

讨论

参考文献

第二部分 LncRNA MIAT调控动脉粥样硬化斑块内巨噬细胞胞葬

材料和方法

1. 材料

2.实验动物

3. 动物分组

4.小鼠血脂的检测

5.血浆中LncRNA MIAT的提取及表达检测

6.主动脉三尖瓣斑块油红O染色

7.细胞培养、处理

8.Si-MIAT转染

9.流式细胞仪分析细胞凋亡

10.细胞总RNA提取

11.LncRNA MIATRT-PCR

12.细胞蛋白提取

12. BCA法测定蛋白浓度、样品准备

13.免疫印迹法(Western Blot)

14.组织切片免疫荧光染色

15. 组织切片H-E染色

16.组织切片Masson染色

17.油红O染色

19. 数据统计分析

结果

1.LncRNA MIAT在高脂喂养16周的ApoE-/-小鼠进展期斑块内细胞的分布规律

2.体外AS模型(ox-LDL诱导)中,LncRNA MIAT在巨噬细胞内的表达规律

3.沉默LncRNA MIAT的表达

4.下调循环中LncRNA MIAT可以增强ApoE -/-小鼠动脉粥样硬化斑块的稳定性

5.MIAT shRNA通过促进巨噬细胞胞葬作用而改善动脉粥样硬化斑块的稳定性

讨论

参考文献

第三部分LncRNA MIAT通过miR-149-5p调控CD47导致巨噬细胞胞葬障碍

材料和方法

1.1 主要试剂与材料

1.2 主要仪器

2.细胞培养

3. 细胞复苏、处理

3. 细胞冻存

5.Si-MIAT转染

6.细胞总RNA提取

7.LncRNA MIATRT-PCR

8.Western blot

9. 骨髓巨噬细胞分离、培养

10.体外胞葬试验

11.质粒抽提

12.双荧光素酶报告基因

13. RNA免疫共沉淀(RIP)实验

结果

1.体外下调LncRNA MIAT可以促进凋亡巨噬细胞的胞葬作用

2.体外模型LncRNA MIAT对的胞葬作用关键分子CD47表达的影响

3.数据库分析发现,miR-149-5p可能是LncRNA MIAT下游靶基因

4. 生物信息学分析表明,miR-149-5p与CD47存在结合位点

5.LncRNA MIAT与miR-149-5p能特异性结合;而CD47是miR-149-5p的直接靶标

6. LncRNA MIAT对miR-149-5p的调控作用

7. LncRNA MIAT+miR-149-5p对CD47蛋白表达的影响

8.LncRNA MIAT与miR-149-5p的相互关系

讨论

参考文献

综述:胞葬在动脉粥样硬化中的研究进展

附录 读博期间发表、待发表文章

致谢

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