盲肌样蛋白1(MBNL1)在血管平滑肌细胞表型转换中作用的研究

目录

声明

英文缩略词及中英文对照

前言

1、 实验仪器及试剂

1.1实验仪器

1.2耗材及试剂

1.3 试剂配制

2、实验方法

2.1大鼠颈动脉球囊损伤模型的建立和标本收集

2.1.1实验对象

2.1.2模型构建及取材

2.2大鼠血管平滑肌原代细胞分离及鉴定

2.2.1大鼠血管平滑肌原代细胞的分离

2.2.2大鼠血管平滑肌原代细胞的传代及培养

2.2.3细胞鉴定

2.3血管平滑肌原代细胞的分组和处理

2.3.1 PDGF -bb 刺激时间、浓度梯度

2.3.2细胞siRNA的转染

2.3.3 细胞慢病毒感染

2.4蛋白免疫印迹

2.4.1血管组织蛋白的提取

2.4.2细胞总蛋白提取

2.4.3测定蛋白浓度

2.4.5蛋白免疫印记

2.5 Transwell细胞迁移实验

2.6 Edu细胞增殖检测

2.7 HE染色

2.8石蜡切片免疫荧光

2.9质粒构建

2.9.1目的片段的获取

2.9.2载体质粒线性化

2.9.3重组反应

2.9.5质粒小量提取

2.9.6质粒鉴定

2.10慢病毒包装

2.11数据统计分析

3.实验结果

3.1 MBNL1在大鼠颈动脉损伤模型中表达增高

3.2 PDGF-bb刺激大鼠VSMCs后MBNL1表达增加

3.3 过表达及敲低MBNL1效率检测

3.4 MBNL1促进大鼠VSMCs收缩基因表达

3.5 MBNL1抑制大鼠VSMCs的迁移功能

3.6 MBNL1对大鼠VSMCs的增殖无明显作用

4.讨论

参考文献

综述:选择性剪接与血管平滑肌

致谢