声明
1 绪论
1.1 小麦概述
1.1.1 小麦的起源和进化
1.1.2 小麦进化研究进展
1.1.3 小麦组学研究进展
1.2 小麦籽粒硬度
1.2.1 籽粒硬度
1.2.2 籽粒硬度的测量方法
1.2.3 小麦籽粒硬度的影响因素
1.3 Pin及相关基因的研究
1.3.1 PIN的发现
1.3.2 PIN蛋白及其研究进展
1.2.3 Puroindolines等位基因多样性
1.2.4Puroindoline b-like基因研究进展
1.4 RNA干扰技术和植物遗传转化
1.4.1 RNA干扰及在小麦中的研究
1.4.2 植物遗传转化
1.5 本研究的目的和意义
1.5.1 立题依据
1.5.2 课题主要研究内容
1.5.3 课题的目的和意义
2 中国小麦的Puroindoline基因多样性及其与籽粒硬度的关系
2.1实验材料与仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.1.3 实验主要试剂和试剂盒
2.1.4 主要试剂的配置
2.2 实验方法和步骤
2.2.1 小麦种质资源的种植和收获
2.2.2 籽粒硬度表型检测
2.2.3 Pin-D1等位基因分型
2.2.4 多抗的制备和免疫印迹实验
2.2.5 数据整理和分析
2.3 实验结果分析
2.3.1 籽粒硬度的表型变化
2.3.2 新的Pin-D1等位基因和等位基因多样性
2.3.3Western blotting
2.4 讨论
2.5 本章小结
3 Puroindoline b-like基因与籽粒硬度
3.1 实验材料与仪器
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.1.3主要试剂和试剂盒
3.2 实验方法和步骤
3.2.1 Pinb-like基因分型及其与籽粒硬度的关系
3.2.2 Pinb-like同源片段在麦类作物中共线性分析
3.2.3 Pinb-like基因组织特异性表达，及其与Pinb基因表达量对比
3.2.4 Pinb-like基因和蛋白的聚类分析
3.3 实验结果
3.3.1 Pinb-like基因的克隆及其与籽粒硬度的关系
3.3.2 Pinb-like基因同源片段的共线性分析
3.3.3 Pinb-like基因组织特异性表达及其与Pinb表达量对比分析
3.3.4 Pinb-like基因以及蛋白的聚类分析
3.4 讨论
3.4.1 Pinb-like基因的克隆及其与籽粒硬度的关系
3.4.2 Pinb-like同源片段的共线性和进化树分析及其小麦演化的影响
3.5 本章小结
4 小麦pAHC25-Pina-RNAi载体及其线性表达框的遗传转化
4.1 实验材料与仪器
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验仪器
4.1.3 主要试剂和试剂盒
4.1.4 主要试剂的配制
4.2 实验方法和步骤
4.2.1 真核表达载体验证和线性表达框的获得
4.2.2 小麦干扰载体的遗传转化
4.2.3 转基因再生植株的PCR检测
4.2.3 籽粒硬度检测
4.2.4小麦籽粒SDS-PAGE和Western blotting分析
4.3 实验结果
4.3.1 真核表达载体pAHC25-Pina-RNAi的验证及其线性表达框的制备
4.3.2 pAHC25-Pina-RNAi载体及其线性表达框的遗传转化
4.3.3 转基因再生植株PCR鉴定
4.3.4 转基因阳性植株的籽粒硬度检测
4.3.5 蛋白检测
4.4 讨论
4.4.1 RNA干扰技术
4.4.2 Pina基因RNA干扰载体及其线性表达框的遗传转化
4.4.3 转基因阳性后代表型分析
4.5 本章小结
5 总结和展望
5.1 全文总结
5.2 本文特色与创新
5.3 课题展望
致谢
参考文献
附录1 攻读学位期间发表的论文
附录2 质粒图谱
附录3 基因序列
附录4 培养基母液配方
