消异汤对大鼠子宫内膜异位症模型作用的实验研究

摘要

目的：
　　 子宫内膜异位症(endometriosis，EMs，简称内异症)是子宫内膜腺体和间质出现并生长在子宫腔被覆内膜及宫体肌层以外的其他部位的一种疾病。该病临床表现多种多样，常见的有痛经、慢性盆腔痛、性交痛、月经异常和不孕，是生育年龄妇女常见的疾病之一，发病率为10％～15％。组织学上异位内膜虽然是良性的，但却具有增生、浸润、转移及复发等恶性行为。目前临床治疗子宫内膜异位症的方法有手术治疗和药物治疗，但手术治疗费用较高且易复发，故探讨有效的药物治疗成为研究热点。西药多针对该疾病为激素依赖性疾病采用激素类药物治疗，但这些药物副作用较大。中药治疗不仅能在一定程度有效地缓解症状，而且副作用小，故探索中药治疗子宫内膜异位症具有十分重要的现实意义。
　　 消异汤是有效治疗子宫内膜异位症的经方，方中含三棱、莪术、蒲黄、五灵脂、紫草、血竭、鳖甲、铁菱角、浙贝母、鹿角霜等十多位中药。本实验以子宫内膜异位症模型大鼠为研究对象，消异汤灌胃治疗，检测使用该药后子宫内膜异位症模型大鼠血清EMAb、E2、P、FSH、LH的表达水平，以及用免疫组化的方法检测VEGF在异位内膜组织的表达，多方面探讨消异汤治疗子宫内膜异位症的作用机理，为其临床应用提供实验依据。
　　 方法：
　　 采用未交配性成熟雌性清洁级健康SD大鼠，体重180～220g，共50只。随机分为5组，假手术组、模型组、米非司酮组、消异汤高剂量组、消异汤低剂量组各10只。除假手术组外，各组大鼠均采用自身移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型，造模2周后开腹肉眼观察造模是否成功。于造模后第15天开始给药。中药低剂量组给予剂量10.5g/kg·d，中药高剂量组给予剂量21g/kg·d，米非司酮组给予5mg/kg·d，假手术组和模型组各给予生理盐水4ml/只·d。各组成模大鼠注入药物体积均为4ml/只；每天灌胃给药1次，连续给药21天。于给药第21日晚8时开始禁食禁水，12小时后处死。取外周血，化学发光法检测大鼠血清E2、FSH、LH的表达水平；酶联免疫吸附法检测大鼠血清EMAb的表达水平。取异位内膜组织，采用免疫组化法检测其VEGF的含量表达。对所有数据进行统计学分析。
　　 结果：
　　 1、病理学证实腹壁移植自体子宫内膜建立大鼠子宫内膜异位症模型造模成功，移植组织成活率为95％。
　　 2、各组大鼠造模前体重无显著性差异。给药21天后，假手术组大鼠体重明显高于模型组大鼠体重；米非司酮组大鼠体重与模型组大鼠体重有统计学差异。
　　 3、造模2周后，各组大鼠移植物体积无统计学差异。对照给药21天后，模型组大鼠异位内膜肉眼观体积较大，米非司酮组、消异汤低剂量组、消异汤高剂量组与模型组移植物大小有统计学差异(P＜0.01)；米非司酮组移植物体积与消异汤低剂量组有统计学差异(P＜0.05)；消异汤低剂量组移植物体积与消异汤高剂量组有统计学差异(P＜0.05)；消异汤高剂量组移植物体积与米非司酮组无统计学差异(P＞0.05)。
　　 4、组织病理学显示模型组异位内膜组织生长良好：异位内膜腺上皮细胞呈柱状或低柱状排列，形态较规则，分泌细胞排列较规则，基底面有少量分泌细胞呈乳突状排列，核大。米非司酮组、消异汤高剂量组的异位内膜生长受到明显的抑制，内膜组织基本萎缩或变性坏死。
　　 5、模型组大鼠异位内膜组织中VEGF的表达量均高于假手术组、米非司酮组、消异汤低剂量组和消异汤高剂量组大鼠子官内膜组织中的VEGF表达量(P＜0.05)。米非司酮组、消异汤低剂量组、消异汤高剂量组的VEGF表达均高于假手术组(P＜0.01)。消异汤低剂量组VEGF表达高于米非司酮组和消异汤高剂量组(P＜0.05)。米非司酮组VEGF表达与消异汤高剂量组比较无显著性差异(P＞0.05)。
　　 6、假手术组EMAb阳性率显著低于模型组、米非司酮组、消异汤低剂量组、消异汤高剂量组(P＜0.05)。模型组EMAb阳性率显著高于假手术组、米非司酮组、消异汤低剂量组、消异汤高剂量组(P＜0.05)，但米非司酮组、消异汤低剂量组、消异汤高剂量组EMAb阳性率之间无统计学差异(P＞0.05)。
　　 7、假手术组雌二醇水平有显著低于模型组、米非司酮组、消异汤低剂量组、消异汤高剂量组(P＜0.01)。模型组、米非司酮组、消异汤低剂量组、消异汤高剂量组各组之间雌二醇水平无统计学显著性差异(P＞0.05)。
　　 8、米非司酮组孕酮水平显著低于其他组(P＜0.01)。其他各组：模型组、假手术组，消异汤低剂量组和消异汤高剂量组孕酮水平不存在统计学差异(P＞0.05)。
　　 9、实验各组FSH、LH表达水平均无统计学差异。
　　 结论：
　　 1、采用大鼠腹壁移植自体子宫内膜制备子宫内膜异位症模型成功率高，移植物生长良好。
　　 2、米非司酮、消异汤均能抑制异位移植物生长。
　　 3、EMs大鼠模型异位内膜VEGF表达水平高于正常内膜组织，提示VEGF在子宫内膜异位症的发病中起了重要的作用。消异汤可降低EMs模型大鼠异位内膜的VEGF的表达水平，提示其抑制新生血管形成可能是其有效抑制模型大鼠子宫内膜异位症的发生、发展的机制之一。
　　 4、米非司酮能显著抑制异位内膜生长，其作用主要的机制与其抗孕酮效应有关，而且米非司酮还能降低异位组织中VEGF的表达，提示米非司酮治疗子宫内膜异位症有多种途径。
　　 5、本实验中，消异汤对内异症大鼠雌二醇、孕酮、卵泡刺激素和黄体生成素的作用没有统计学意义，但其能有效降低抗子宫内膜抗体的表达，提示其治疗子宫内膜异位症的主要机制在于调节机体免疫功能，减轻自身抗体对机体的影响。
　　 6、经过本次试验，初步探讨了消异汤治疗子宫内膜异位症的可能机制，但仍有太多不解之迷，今后我们要设计更加科学的实验方案，增加实验样本数量，更好的研究传统中医药。

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