红花黄素体外诱导大鼠BMSCs分化为神经元样细胞后移植治疗SCI

摘要

目的:探讨红花黄素体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）转化为神经元样细胞局部移植对大鼠脊髓损伤（SCI）的保护作用和机制，为临床治疗 SCI提供理论基础。
　　方法:50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、红花黄素组、MSCs组、治疗组。采用改良Allen法构建大鼠SCI模型，正常组给予常规喂养，不予任何处理；模型组在损伤局部注射生理盐水；红花黄素组经腹腔注射红花黄素；MSCs组在损伤局部MSCs移植；治疗组在在损伤局部给予体外诱导的神经元样细胞移植。采用改良BBB评分对大鼠行为学检查，测量抓握、维持姿势能力，评价脊髓损伤的功能恢复情况，免疫荧光技术检测GFP-GFAP、GFP-NeuN和NGF，终点比色法检测损伤MDA、SOD。
　　结果:
　　（1）各组BBB评分与正常组比较在第24h、7d、14d、28d均显著降低，差异有统计学意义；各组BBB评分与同期模型组比较，差异有统计学意义；各组BBB评分与同期红花黄素组比较，差异有统计学意义；各组BBB评分与同期MSCs组比较，差异有统计学意义。
　　（2）各组 GFAP阳性细胞数与正常组比较在第24h、7d、14d、28d均显著升高，差异有统计学意义；除第24h外，各组与同期模型组比较，差异有统计学意义；除第24h外，各组与同期红花黄素组比较，差异有统计学意义；除第24h外，各组与同期MSCs组比较，差异有统计学意义。
　　（3）各组NGF阳性细胞数与正常组比较在第24h、7d、14d、28d均显著升高，差异有统计学意义；各组与同期模型组比较，差异有统计学意义；各组与同期红花黄素组相比较，差异有统计学意义；各组与同期MSCs组相比较，差异有统计学意义。
　　（4）各组 NeuN阳性细胞数与正常组比较在第24h、7d、14d、28d均显著升高，差异有统计学意义；各组与同期模型组比较，差异有统计学意义；各组与同期红花黄素组比较，差异有统计学意义；各组与同期MSCs组比较，差异有统计学意义。
　　（5）各组SOD含量与正常组比较在第24h、7d、14d、28d均显著降低，差异有统计学意义；各组与同期模型组比较，差异有统计学意义；各组与同期红花黄素组比较，差异有统计学意义；各组与同期MSCs组比较，差异有统计学意义。
　　（6）各组MDA含量与正常组比较在第24h、7d、14d、28d均显著降低，差异有统计学意义；在第7d、14 d、21 d、28 d各组与同期模型组比较，差异有统计学意义；在第7d、14 d、21 d、28 d各组与同期红花黄素组比较，差异有统计学意义；在第7d、14 d、21 d、28 d各组与同期MSCs组比较，差异有统计学意义。
　　结论:
　　（1）红花黄素能体外诱导BMSCs转化为神经元样细胞。
　　（2）神经元样细胞移植能改善SCI大鼠BBB评分。
　　（3）神经元样细胞移植可以显著显善大鼠SCI的病理变化，使GFAP、NeuN、NGF的表达明显增加，减少胶质瘢痕形成,对损伤脊髓神经元再生修复和功能恢复具有重要意义。
　　（4）神经元样细胞移植治疗SCI的作用机制可能为升高 SOD含量，降低MDA含量，抑制自由基反应。

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中文摘要

英文摘要

中英文对照和缩略表

前言

1．实验动物、实验试剂与仪器

1.1实验动物

1.2试剂

1.3实验仪器

2．实验方法

2．1红花黄素体外诱导MSCs分化神经元样细胞

2.2动物模型制备细胞移植操作

2.3动物分组与处理

3．观测指标及方法

3.1行为学评价

3.2组织病理学检查

3.3免疫组织化学分析

4．统计处理

5．结果

5.1各组不同时间肢运动功能评分的比较

5.2各组不同时间GFAP阳性细胞数的比较

5.3各组不同时间NGF阳性细胞数的比较

5.4各组不同时间NeuN阳性细胞数的比较

5.5各组不同时间脊髓 SOD 含量的比较

5.6各组不同时间脊髓 MDA 含量的比较

5.7组织形态学观察

5.8 各组不同时间GFAP 的表达

讨论

一、干细胞移植在脊髓损伤中的研究

二、红花黄素体外诱导的神经元样细胞移植GFAP、NeuN、NGF表达的影响

三、红花黄素体外诱导的神经元样细胞移植对SOD、MDA的影响

四、中医学对SCI的认识及红花黄素对SCI修复的影响

结论

参考文献

附录

附录一 文献综述：干细胞移植在脊髓损伤修复中的研究进展

附录二　各组不同时间HE染色图片

附录三　各组不同时间GFAP、NeuN、NGF表达情况

附录四在校期间公开发表的学术论文

致谢