罗汉松实醇提物对人胃癌细胞的抑制作用研究

摘要

目的：本文旨在通过药物体外实验，初步筛选出对肿瘤细胞MGC-803有抑制作用的罗汉松实提取部位，并联合流式细胞术以及实时荧光定量 PCR技术对罗汉松实提取物抗肿瘤作用的机制进行初步探讨。
　　胃癌，是常见的消化道恶性肿瘤，在我国有着较高的发生率和死亡率，已成为严重危害人们身体健康的疾病。据报道，每年约有六十四万人因胃癌而死亡。目前，胃癌的治疗手段以手术治疗为主，再加以化学疗法、放射疗法、分子靶向治疗等辅助疗法。值得一提的是，中医药作为我国的文化瑰宝，具有较小的毒副作用，能在缓解患者因疾病或放化疗而产生痛苦的同时提高其术后生存率，在胃癌的治疗方面起着重要的作用。
　　罗汉松科植物罗汉松Podocarpus macrophyllus(Thunb．)D．Don，又名罗汉杉、长青罗汉杉、土杉、金钱松、仙柏、罗汉柏、江南柏，为常绿乔木。由于罗汉松种托大于种子，成熟时呈红色，加上绿色的种子，形似罗汉，故名罗汉松。罗汉松种子及其种托合称为罗汉松实。研究表明[1-2]，罗汉松属植物所含的双黄酮、芹菜素等成分对胃癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌等各种癌症均有一定的防治作用，由于未见罗汉松实提取物体外抗肿瘤方面的研究，故本实验以人胃癌细胞MGC-803为研究对象，初步探讨罗汉松实提取物对肿瘤细胞的生长抑制作用，为进一步研究其抗肿瘤机制提供理论依据。
　　方法：1.罗汉松实醇提物的制备：人工将罗汉松种子及其种托分离，粉碎后分别用水，95％，75%，50%乙醇对其进行提取，将得到的不同浓度乙醇部位罗汉松实提取物进行冷冻干燥，备用。
　　2.罗汉松实醇提物生物活性的筛选：本文以体外培养的人胃癌细胞MGC-803为研究对象，选用噻唑蓝（MTT）法测定罗汉松实提取物对MGC-803细胞的增值抑制率，将半数致死率作为评定指标筛选出罗汉松实提取物的活性部位。
　　3.确定最佳给药浓度：将筛选出的罗汉松实醇提物的生物活性部位配置成不同浓度梯度的溶液，通过MTT实验，寻找活性部位的最佳给药浓度。
　　4.运用流式细胞术研究罗汉松实提取物活性部位对MGC-803细胞的细胞周期影响。
　　5.运用实时荧光定量PCR技术研究罗汉松实醇提物活性部位作用于人胃癌细胞MGC-803后，肿瘤细胞中的凋亡相关基因BcL-2、P53、C-myc以及Bax的相对表达情况。
　　结果：1. MTT筛选实验结果显示，对人胃癌细胞MGC-803有生长抑制作用的是罗汉松种子提取物，其中的活性部位为95%乙醇提取物，当该部位溶液浓度为50μg/ml时，作用MGC-803细胞48小时后，对人胃癌细胞的抑制率达到68.38%，且其作用强度与作用时间呈正相关关系。
　　2.流式细胞仪检测人胃癌细胞 MGC-803的凋亡率实验结果表明，MGC-803细胞的凋亡率与罗汉松种子提取物95%乙醇部位的给药浓度呈正相关关系，随着给药浓度的增加，细胞凋亡率也随之增大。
　　3.实时荧光定量PCR结果表明，与对照组相比，不同质量浓度罗汉松种子提取物95%乙醇部位作用于MGC-803细胞，显著性下调细胞凋亡相关基因Bcl-2和C-myc，上调P53和Bax。
　　结论：罗汉松种子醇提物在体外对人胃癌细胞MGC-803均有明显的增值抑制作用，其中的生物活性部位为罗汉松种子95%的乙醇提取部位，且随着提取物浓度的增加和作用时间的延长，其对胃癌细胞的抑制率呈上升趋势，这可能与其能调控相关凋亡基因的表达有关。

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缩略词表

前言

1.罗汉松实醇提物的制备

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3 实验讨论

2. MTT法对罗汉松实醇提物进行生物活性部位的筛选

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3统计学分析

2.4 实验结果

2.5 实验讨论

3.MTT法确定罗汉松实醇提物生物活性部位的最佳给药浓度

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 数据处理

3.4 实验结果

4.流式细胞术 AnnexinVFITC-PI 法检测罗汉松实醇提物生物活性部位对MGC-803细胞凋亡的影响

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 统计学分析

4.4 实验结果

4.5 实验讨论

5. 罗汉松实醇提物生物活性部位抗肿瘤作用机制的研究

5.1 实验材料

5.2 实验方法

5.4 实验结果

5.5 实验讨论

结语与创新

参考文献

文献综述: 胃癌及罗汉松属植物的研究概况

附录

致谢