宫腔粘连子宫内膜中整合素αⅤβ3和LIF的表达及麒麟丸改善宫腔粘连子宫内膜容受性的动物研究

摘要

目的：采用免疫组织化学法（ IHC）及半定量逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR），通过对比宫腔粘连组患者与正常对照组患者种植窗期子宫内膜组织中整合素αVβ3（IntegrinαVβ3）和白血病抑制因子（LIF）蛋白及基因的表达情况，进而探讨宫腔粘连患者子宫内膜容受性的改变，明确整合素αVβ3及LIF能否作为判定改善IUA患者子宫内膜容受性的评价指标。通过研究麒麟丸对宫腔粘连SD大鼠孕早期子宫内膜组织中整合素αVβ3（IntegrinαVβ3）及白血病抑制因子（LIF）蛋白及基因表达的影响，探讨麒麟丸改善宫腔粘连大鼠子宫内膜组织容受性的可能机制，以期为临床上治疗 IUA所致子宫内膜容受性下降引起生育障碍性疾病等棘手问题提供新思路、新方法。
　　方法：1.临床实验：选取已确诊为宫腔粘连并在我院行宫腔镜下宫腔粘连分离术的15例患者为研究组，因子宫纵隔、子宫内膜息肉等疾病需行宫腔镜手术治疗的15例患者为对照组。各组术中收集适量子宫内膜组织分为两份，一份标本经甲醛固定后行免疫组织化学检测法检测整合素αVβ3及LIF的蛋白含量；另一份标本经液氮充分研磨后提取组织RNA，行实时荧光定量测定整合素αVβ3及LIF mRNA的表达，并进行统计学分析。
　　2.动物实验：选取健康成熟雌性SD大鼠36只，随机分为模型中药组12只，模型对照组12只，空白对照组12只，用阴道涂片的方式监测各组大鼠动情周期，大鼠动情期利用苯酚胶浆法对模型中药组、模型对照组大鼠建立宫腔粘连模型，空白对照组行假手术处理，造模术后第10天各组大鼠随机处死2只，取造模侧子宫组织行HE染色和Masson染色，以确定造模是否成功，造模成功次日开始对模型中药组大鼠灌胃麒麟丸混悬液2ml，模型对照组及空白对照组分别灌胃生理盐水2ml，各组均2次/日，各组大鼠于灌胃15天后按2：1雌雄合笼，使其自然受孕，各组大鼠于妊娠第5天断颈处死，收集造模侧子宫组织，取其中一段经甲醛固定后行免疫组织化学法检测整合素αVβ3、LIF的蛋白表达量，另一段纵向剖开刮取子宫内膜组织经液氮充分研磨后提取组织RNA，行实时荧光定量测定整合素αVβ3及LIF mRNA的表达，并进行统计学分析。
　　结果：1.临床实验：临床组织蛋白含量检测结果：宫腔粘连组子宫内膜组织中整合素αVβ3及LIF的蛋白表达水平明显低于正常对照组；临床组织mRNA含量检测结果：宫腔粘连组子宫内膜组织中整合素αVβ3及 LIF的mRNA表达水平明显低于正常对照组。差异均有统计学意义（P<0.05）。
　　2.动物实验：
　　A确定造模：造模术后第10天，模型中药组及模型对照组随机处死的SD大鼠经HE染色均可见宫腔部分甚至近乎完全堵塞，粘膜下腺体减少，纤维化增生明显，排列紊乱；空白对照组随机处死的SD大鼠经HE染色可见宫腔形态规则，内膜较厚，间质内可见丰富的腺体、血管和少量排列整齐的成纤维细胞。模型中药组和模型对照组的SD大鼠经Masson染色可见子宫粘膜下层胶原纤维明显增多，排列紊乱且致密；空白对照组的SD大鼠经Masson染色可见子宫粘膜下层有少量的胶原纤维，呈蓝色梭形，排列规则。
　　B整合素αVβ3、LIF的表达：模型中药组、模型对照组子宫内膜整合素αVβ3、LIF蛋白及mRNA表达均明显低于空白对照组；模型中药组子宫内膜整合素αVβ3、LIF蛋白及mRNA表达明显高于模型对照组，且差异均有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：1.本实验中宫腔粘连组患者子宫内膜中整合素αVβ3、LIF蛋白及mRNA的表达均较正常对照组患者子宫内膜低，提示宫腔粘连影响了子宫内膜容受性的建立。2.模型对照组大鼠子宫内膜整合素αVβ3、LIF的表达较空白对照组低，提示宫腔粘连大鼠子宫内膜容受性下降，模型中药组大鼠经麒麟丸灌胃后整合素αVβ3、LIF的表达较模型对照组上调，提示麒麟丸对IUA大鼠子宫内膜容受性具有改善作用，可能与上调子宫内膜中整合素αVβ3、LIF的表达有关，但其具体作用机制和靶点尚需进一步研究。

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缩略词表

前言

正文

第一部分 临床研究

1 临床资料

2 研究方法

3 统计学方法

4 结果

第二部分 实验研究

1 SD大鼠宫腔粘连模型建立

2 实验方法

3 结果判定

4 统计学方法

5 结果

讨论

1 课题设计的现代医学背景

2 课题设计的中医理论基础

3 本课题创新之处

4 本课题相关问题

5 进一步研究

结语

参考文献

文献综述: 中医药治疗宫腔粘连的研究进展

致谢