针灸对AD模型大鼠海马区Aβ内化相关蛋白酶的影响研究

摘要

目的：老年斑是阿尔茨海默病特征性病理改变之一，β淀粉样蛋白是老年斑的核心物质，因此减少Aβ的过量生成或加速其内化，减少Aβ的聚集、沉降，是改善阿尔茨海默病病理进程的重要途径之一。根据目前已经发表的研究文献，有关Aβ的生成途径方面的研究已有了一定深度的探索，而有关Aβ内化方面的研究还需要更进一步的深入。本课题从Aβ降解的方面进行研究，选取脂蛋白酯酶、抗凝乳蛋白酶α、载脂蛋白E作为研究指标，通过观察针灸百会和肾俞穴对星形胶质细胞的激活，及此三种蛋白酶与Aβ关系，探讨“益肾调督”针灸法治疗阿尔茨海默病的可能作用机制。方法：选用Wistar大鼠、SPF级、雄性、体重（360±20）g，造模前所有大鼠经Morris水迷宫筛选，将符合条件的60只Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、治疗组。模型组用微量注射法向双侧海马区各注射5μL寡聚态Aβ1-42；假手术组用同样方法在双侧海马区注射与Aβ1-42等量的生理盐水；治疗组在造模成功的基础上选取百会穴和肾俞穴进行常规针刺（针具规格：长25mm直径0.35mm毫针），选用细艾条（半径约0.25mm）在大鼠腧穴上方2～3cm处进行温和灸，每穴15min；正常组不做任何处理，常规饲养。每日1次，6天为1个疗程，共2个疗程，疗程间休息1日。针灸治疗结束后，各组选取10只进行指标检测：（1）采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力；（2）采用ELISA法检测血清中Aβ1-42的含量；（3）采用免疫组化法检测大鼠海马区GFAP蛋白的表达水平；（4）采用Western-Blot法检测大鼠海马区GFAP和Aβ内化相关蛋白酶ACT、LPL、ApoE的表达。
　　结果：两个疗程治疗结束后，
　　（1）行为学观察：与模型组相比，治疗组大鼠跨越平台数增加（P<0.01），而逃避潜伏期则缩短（P<0.01）。
　　（2）ELISA检测结果：与正常组相比，模型组Aβ1-42明显升高（P<0.01），假手术组Aβ1-42未有明显差异（P＞0.05）；与模型组相比，治疗组Aβ1-42明显降低（P<0.05）。
　　（3）免疫组化结果：和正常组相比，模型组GFAP表达升高,具有统计学差异（P＜0.01）；和模型组相比，治疗组平均光密度值没有显著差异（P＞0.05）；和正常组比较，治疗组GFAP平均光密度值具有显著差异（P＜0.05）。（4）Western-Blot检测结果：与正常组相比，模型组GFAP蛋白表达显著升高（P<0.01），假手术组GFAP表达则未有明显差异（P＞0.05）；与模型组相比，治疗组GFAP表达稍降低，无统计学差异（P＞0.05）。与正常组相比，模型组LPL、ApoE蛋白表达显著降低（P<0.01），ACT表达显著升高（P<0.01），假手术组LPL、ApoE、ACT表达则未有明显差异（P＞0.05）；与模型组比较，治疗组LPL、ApoE表达显著升高（P<0.05），ACT表达显著降低（P<0.05）。
　　结论：“益肾调督”针灸法可以通过上调大鼠海马区LPL和ApoE的表达，下调ACT的含量，促进Aβ的内化，减少β淀粉样蛋白的沉积，从而延缓或改善阿尔茨海默病的病理进程。

目录

声明

英文缩略词对照表

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 针灸对AD模型大鼠行为学的影响

2 针灸对AD模型大鼠血清Aβ1-42的影响

3 针灸对AD模型大鼠海马区GFAP蛋白表达的影响

4 针灸对AD模型大鼠海马区LPL、ApoE、ACT蛋白表达的影响

讨论

1 中医对阿尔茨海默病的认识

2 西医对阿尔茨海默病的认识

3 动物模型选择

4 选穴依据

5 星形胶质细胞与AD

6 星形胶质细胞与Aβ

7 Aβ内化相关蛋白酶与AD

8“益肾调督”针灸法治疗AD的机理探讨

9 创新与不足

结语

参考文献

综述:β-淀粉样蛋白对阿尔茨海默病发病机制的研究

致谢