基于回乳与消食作用的麦芽炮制工艺及芽长研究

摘要

目的： 本研究在前期实验基础上，基于麦芽回乳与消食作用，建立麦芽炮制工艺并优选芽长。探讨麦芽在发芽过程中甲醇提取物HPLC指纹图谱特征及生物碱物质变化规律；比较不同芽长麦芽水煎液回乳消食作用的差异；从麦芽药效物质生物碱变化规律以及回乳消食药效学角度共同优选麦芽发芽炮制工艺及其芽长。 方法： （一）以麦芽生物碱物质含量及淀粉酶活力为评价指标，在单因素试验基础上，通过正交试验考察浸泡时间、发芽温度、发芽湿度及每日洒水量对大麦发芽的影响。麦芽中总生物碱及大麦芽碱含量测定方法依据本课题组前期的实验方法进行；麦芽中淀粉酶活力测定采用3，5-二硝基水杨酸(DNS)比色法。 （二）用WondaSil○R C18色谱柱(4.6 mm3250 mm，5μm)，以甲醇-0.1 mol2L-1磷酸二氢钾溶液为流动相梯度洗脱，柱温25℃，流速1.0 mL2min-1，检测波长270 nm。制备10批生麦芽药材指纹图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）对其进行相似度评价，在相同条件下比较麦芽发芽炮制过程HPLC图谱的差异；通过图谱信息探讨麦芽在发芽过程中物质成分变化规律。采用HPLC色谱法及酸性染料比色法研究麦芽发芽过程生物碱物质动态变化。 （三）高泌乳素血症模型建立：采用背部皮下方式注射盐酸甲氧氯普胺复制高泌乳素血症大鼠模型，按照75 mg2kg-1剂量，每天上午注射1次，连续10天。 采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组大鼠血清中泌乳素（PRL）、孕酮（P）、雌二醇（E2）含量；采用免疫组化法测定各组大鼠下丘脑多巴胺D1、D2受体阳性反应及脑垂体PRL细胞阳性反应；采用荧光定量聚合酶链式反应法（PCR）测定各组大鼠脑垂体 PRL mRNA表达水平。 （四）采用炭末推进实验，测定各不同芽长麦芽水煎液组小肠推进率以及胃排空率;采用酶联免疫（ELISA）法测定各组小鼠血清胃蛋白酶与胃泌素的含量。 结果： （一）优选的炮制工艺为：用水浸泡5h，环境温度25℃，湿度70%，每日洒水量（与大麦的比重）1:1；洒水方式为多次少量，控制麦芽含水量在20%-35%之间。常压下70℃干燥12h。 （二）10批不同芽长麦芽样品HPLC指纹图谱中有19个共有峰，7号峰为大麦芽碱。生大麦在发芽炮制后，新增加了5，7，8，10，12，15，16，17号峰；在发芽过程中，1，6，9，13号峰的峰面积逐渐增大后减小，在芽长为0.75 cm时达到最大；3，5，8，17，18，19号峰的峰面积逐渐增大后趋平。麦芽芽长为0.75 cm时，总生物碱含量最大。 （三）对血清中PRL含量的影响：与正常组（3.91±1.49 ng?ml-1）比较，模型组大鼠血清中PRL（38.54±1.93 ng?ml-1，P<0.01）的含量明显升高；与模型组比较，溴隐亭阳性药组以及不同芽长麦芽水煎液组大鼠血清中PRL的含量均有明显降低（P<0.01）,其中溴隐亭阳性药组以及0.75cm（4.41±2.49 ng? ml-1）、1.00cm（4.72±2.45 ng? ml-1）、1.25cm（4.69±3.61 ng? ml-1）芽长麦芽水煎液组大鼠血清中PRL的含量接近正常组水平。表明不同芽长麦芽水煎液对高泌乳素血症具有一定的治疗效果，麦芽芽长为0.75cm至1.25cm效果最佳。 与正常组（553.09±48.74）比较，模型组大鼠泌乳素细胞的累计光密度值（27415.48±1072.01）显著升高（P<0.01）；与模型组相比，溴隐亭阳性药组以及不同芽长麦芽组大鼠脑垂体泌乳素细胞的累计光密度值显著降低（P<0.01），其中0.50 cm至1.25 cm芽长麦芽组泌乳素阳性细胞的减少量多于其他芽长麦芽组，尤其是0.75 cm（1794.35±347.62）芽长麦芽组最为明显。 PRL细胞mRNA在各组大鼠脑垂体组织中都有表达，与正常组（4.23±5.27）比较，模型组PRL细胞mRNA的表达水平（22.78±4.12）明显升高（P<0.01）。与模型组比较，溴隐亭阳性药组（5.62±4.77）以及0.50cm（8.41±6.90）、0.75cm（6.43±3.74）、1.00cm（7.83±4.21）芽长麦芽组有明显差异，尤其是0.75cm芽长麦芽组（P<0.01）,PRL细胞mRNA的表达水平显著低于模型组。 与正常组（674.52±72.90）比较，模型组（9.55±6.07）、溴隐亭阳药组（170.66±12.00）及各麦芽组大鼠下丘脑D1受体表达数量明显降低（P<0.01）；与模型组比较，溴隐亭阳性药组以及不同芽长麦芽组大鼠下丘脑D1受体表达数量均明显升高（P<0.01或P<0.05），但仍显著低于正常组。 与正常组（222.41±33.28）比较，模型组（41.89±14.01）、溴隐亭阳药组及0.25cm、0.50cm、1.50cm、1.75cm、2.00cm芽长麦芽组大鼠下丘脑D2受体表达数量明显降低（P<0.01或P<0.05）。与模型组比较，不同芽长组大鼠下丘脑D2受体表达数量显著升高（P<0.01或P<0.05）,其中0.75cm（180.04±37.72）、1.00cm（179.29±22.99）、1.25cm（179.28±30.59）芽长组接近正常组，表明此三组可使大鼠下丘脑D2受体表达数量恢复至正常，同时提示D2受体应是麦芽发挥回乳作用主要靶点。 （四）小鼠小肠推进率及胃排空率结果：与正常对照组（31.90±3.48）比较，不同芽长麦芽组均能增强小鼠小肠推进率（P<0.01或P<0.05），其中0.75cm至2.00cm芽长麦芽水煎液组显著增加（P<0.01）；0.25 cm至1.50cm芽长麦芽组均能增强小鼠胃排空率（P<0.01或P<0.05），其中0.75cm至1.25 cm芽长麦芽水煎液组显著增加（P<0.01）。结合麦芽对小鼠小肠推进率以及胃排空率的影响，综合分析，麦芽芽长在0.75 cm至1.25 cm之间效果最佳。 结论： （一）市售的麦芽药材品质不一，没有统一的发芽炮制规范，本文建立的麦芽发芽炮制工艺稳定可行性强，可保证炮制后麦芽药材芽长均一，药效物质含量稳定。 （二）从化学成分及生物碱含量角度建议麦芽发芽芽长0.75至1.00 cm；从麦芽回乳消食作用疗效角度综合分析建议麦芽发芽芽长0.75cm至1.25cm。 （三）麦芽回乳作用机制既作用于大鼠脑垂体泌乳素细胞发挥直接分泌作用，也通过下丘脑多巴胺D2受体介导调控泌乳素分泌，从两个途径发挥回乳功效。 （四）建议新版《中国药典》增加麦芽药材质量控制标准（统一麦芽炮制工艺规范及胚芽长度，限定麦芽发芽的温湿度等因素，增加麦芽药效物质及含量为指标等），使药材质量标准更为合理可行。

目录

声明

缩略词表

前言

第一章 麦芽发芽炮制工艺研究

1 浸泡时间、溶剂及环境温湿度对麦芽质量影响

2 干燥温度及方式对麦芽质量影响

第二章 麦芽甲醇提取物HPLC指纹图谱特征及药效物质含量测定

1 麦芽及其不同炮制品HPLC指纹图谱比较

2 发芽炮制过程中HPLC指纹图谱及生物碱含量变化规律

第三章 不同芽长麦芽对高泌乳素血症模型大鼠的影响

1 对模型大鼠体内血清激素含量影响

2 对模型大鼠脑垂体泌乳素细胞阳性反应及mRNA表达影响

3 对模型大鼠下丘脑多巴胺D1、D2受体影响

第四章 不同芽长麦芽消食作用比较

1 不同芽长麦芽中淀粉酶活力比较

2 对小鼠小肠推进及胃排空影响

讨论

结语与创新

1 我们得出的结论

2 本文的创新性

3 本实验存在的一些待解决的问题

参考文献

附录

附录一 文献综述:中药指纹图谱研究技术及应用进展

附录二 实验相关公式及图片

附录三 在校期间发表论文与参与课题

致谢