基于FXR探讨利胆合剂治疗婴儿胆汁淤积性肝病的作用机制研究

摘要

目的： 从胆汁酸自身反馈调节角度探讨利胆合剂对α-萘异硫氰酸酯（ANIT)诱导的急性肝内胆汁淤积模型幼龄大鼠FXR、SHP、UGT2B4、BSEP基因及蛋白表达的影响，观察大鼠血清生化指标及肝脏组织病理变化，明确利胆合剂治疗婴儿胆汁淤积性肝病的作用靶点。研究内容与方法： 1.造模：根据淤胆型肝炎动物模型的建立方法，将30只雌雄各半、体重70-90g的SPF级离乳后幼龄SD大鼠，入住SPF屏障系统中饲养，不同药物干预第5天时，除正常组外，一次性予ANIT灌胃建立肝内胆汁淤积模型。 2.动物分组及干预方法: 将30只雌雄各半SPF级离乳后幼龄SD大鼠，适应性喂养3天后予称重，将大鼠按体重随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸组、利胆合剂高剂量组、利胆合剂低剂量组，每组六只，雌雄各半。 正常组（N）：予生理盐水连续灌胃6天 模型组（M）：予生理盐水灌胃4天，第5天予ANIT溶液（1ml/100g）灌胃给药1次 熊去氧胆酸组（UDCA）：0.3%熊去氧胆酸（2ml/100g）灌胃6天，第5天灌胃后间隔4-6小时另予ANIT溶液（1ml/100g）灌胃给药1次 利胆合剂高剂量组（LDM-H）：利胆合剂（7.4g/2ml）灌胃6天，第5天灌胃后间隔4-6小时另予ANIT溶液（1ml/100g）灌胃给药1次 利胆合剂低剂量组（LDM-L）：利胆合剂（7.4g/4ml）灌胃6天，第5天灌胃后间隔4-6小时另予ANIT溶液1ml/100g）灌胃给药1次3.检测指标:①检测大鼠的TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、γ-GT、ALP;②各组大鼠肝脏苏木精伊红染色，观察肝脏形态结构变化。③实时PCR方法检测肝脏FXR、SHP、UGT2B4、BSEP基因表达水平。④ Western blotting方法检测肝脏FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达水平。 结果： 1.利胆合剂高剂量组可以改善肝内胆汁淤积的症状,降低TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、γ-GT、ALP的水平优于熊去氧胆酸组，并能减轻胆汁淤积造成的肝脏损害、修复受损的肝脏组织，有明显的利胆保肝作用。 2.利胆合剂高剂量组、利胆合剂低剂量组、熊去氧胆酸组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表达水平均显著高于模型组；利胆合剂高剂量组、利胆合剂低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表达水平显著高于熊去氧胆酸组；且利胆合剂高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表达水平均高于利胆合剂低剂量组。 3.利胆合剂高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达水平高于熊去氧胆酸组,利胆合剂低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达水平与熊去氧胆酸组相比两者无显著差异；且利胆合剂高剂量组SHP、UGT2B4蛋白表达水平显著高于利胆合剂低剂量组。 结论： 利胆合剂对ANIT诱导的急性肝内胆汁淤积模型幼龄大鼠具有保肝利胆的功效，对胆汁淤积及其引起的肝损害有明显的治疗作用，其机制可能为利胆合剂通过干预FXR上调SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白的表达来促进胆汁酸在肝内的排泄，修复胆汁淤积引起的肝损害。

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缩略词表

前言

第一部分 文献研究

1.1婴儿胆汁淤积性肝病的中医研究

1.2 婴儿胆汁淤积性肝病的现代医学研究

1.3 法尼醇X受体在胆汁酸代谢中的作用机制研究

第二部分 利胆合剂基于FXR调节胆汁酸代谢的实验研究

2.1 材料与方法

2.2. 实验结果

2.3 讨论

结语

1.研究结果

2.创新点

3.展望

文献综述：中医药治疗胆汁淤积肝病的研究进展

参考文献

致谢