大豆根腐病生防菌的鉴定及发酵条件的优化

摘要

为明确HNDF2菌的分类地位并研究其对大豆根腐病的防治效果，对HNDF2菌进行了分类鉴定、发酵条件优化及室内抑菌效果检测等试验。
　　 利用侧孢芽孢杆菌BL-21发酵液、HNDF2菌株发酵液及两菌1∶1混合发酵液对引起大豆根腐病的4种病原真菌进行了生防效果的比较，结果表明三种发酵液对大豆根腐病病菌均有生防效果。其中HNDF2菌株在双对峙平板培养试验中显示对尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、禾谷镰刀菌和串珠镰刀菌的拮抗作用效果明显，分别为60.61％、27.5％、91.20％和54.67％；HNDF2菌株发酵液对4种病原真菌的菌丝体生长抑制率分别为26.23％、23.86％、53.82％和67.62％。
　　 大豆萌发及试管苗促生作用结果显示：BL-21、HNDF2、及两菌1∶1混合发酵液均能有效地促进大豆幼苗的生长。其中，HNDF2菌发酵液对株高的增高率为21.49％，对根长的增长率为18.27％。温室盆栽试验结果表明：三种发酵液处理都能降低大豆根腐病的发病程度，病情指数分别为65.56、68.89和69.17，显著低于对照组91.67，防效分别为28.48％、24.85％、24.54％。经过HNDF2菌株发酵液处理的植株，根长、根干重、根瘤数、结荚数和百粒重等有明显提高。
　　 通过对HNDF2菌株的形态特征、培养特征和生理生化特征分析，并结合16SrDNA序列的分子鉴定结果，表明HNDF2菌株为枯草芽孢杆菌。
　　 通过单因素试验和响应面优化法对枯草芽孢杆菌的培养基配方进行了优化。单因素试验结果表明以葡萄糖为碳源，蛋白胨为氮源，加入Mn2+、Ca2+和广能提高HNDF2发酵液的抑菌效果。通过响应面优化法确定了最佳培养基配方为：葡萄糖9.64g/L、蛋白胨12.15g/L、碳酸钙2.44g/L、NaCl4g/L、KH2PO40.2g/L、MnSO40.5g/L。采用优化的培养基制备的发酵液进行抑菌试验，病原菌菌落直径为17.43mm，与预测值接近，说明优化模型可靠。通过单因素试验优化的发酵条件为34℃，pH7.5，装液量50mL/250mL，培养时间为48h。
　　 采用优化的发酵培养基和发酵条件制备了HNDF2菌的发酵液，抑菌试验结果表明，与优化前的发酵培养基和发酵条件相比，对大豆根腐病病菌的抑制率提高了46.35％。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章绪论

1.1大豆根腐病简介

1.1.1发生、分布及危害

1.1.2病原菌

1.1.3病原菌的寄主范围

1.1.4病原菌的侵染循环及影响发病的因素

1.1.5大豆根腐病症状

1.2大豆根腐病的防治概况

1.2.1农业防治措施

1.2.2化学防治

1.2.3生物防治

1.3本课题研究的目的和意义

第2章材料与方法

2.1试验材料

2.1.1供试菌株

2.1.2主要药品及试剂

2.1.3主要仪器设备

2.1.4主要培养基

2.2试验方法

2.2.1发酵液的制备

2.2.2室内抑菌效果及对大豆安全性评价

2.2.3生防菌HNDF2的鉴定

2.2.4培养基成分和培养条件的优化

第3章结果与分析

3.1室内抑菌效果及对大豆安全性评价

3.1.1发酵液抑菌活性的比较

3.1.2双对峙平板培养法检测发酵液的抑菌效果

3.1.3菌丝体干重法检测发酵液对病原菌菌丝体生长的影响

3.1.4发酵液对大豆萌发及发芽初期生长的影响

3.1.5温室盆栽试验结果

3.2 HNDF2菌的鉴定

3.2.1菌落及形态特征

3.2.2生长条件试验

3.2.3菌株HNDF2的生理生化特征

3.2.4分子生物学鉴定结果

3.3培养基成分和培养条件的优化

3.3.1培养基成分优化的单因素试验

3.3.2响应面法优化培养基成分

3.3.3培养条件的优化

第4章讨论

4.1室内抑菌效果及对大豆安全性评价

4.2 HNDF2菌的鉴定

4.3发酵工艺的优化

4.3.1单因素试验法

4.3.2响应面优化法

4.4工作展望

第5章结论

5.1室内抑菌效果及对大豆安全性评价

5.2 HNDF2菌的鉴定结果

5.3培养基成分和培养条件的优化

参考文献

致谢